[发明专利]一种用于沙门氏菌分子分型的分子马达生物传感器试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于一种对沙门氏菌进行快速分子分型判断的试剂盒，具体地说是用试剂盒中的F₀F₁-ATPase分子马达生物传感器Chro-invA、Chro-hut、Chro-spvR、Chro-sdf对沙门氏菌(Salmonella)的属特异性基因invA、hut，毒性质粒基因spvR和肠炎沙门氏菌种特异性基因sdf进行检测，从而对Salmonella是否携带毒性质粒以及是否为肠炎沙门氏菌进行分型判断。 

背景技术

Salmonella是自然界普遍存在的一种致病菌，在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌引起的中毒病例占第一位或第二位。它引起的疾病主要分为两大类：一类是伤寒等烈性传染病，另一类是急性肠胃炎。常见的肉类食品和奶蛋类食品都可以被沙门氏菌污染，其中鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌等是常见的污染菌，它们是引起人类沙门氏菌食物中毒的主要致病菌，已对食品安全构成了严重威胁。 

Salmonella致病性的分子机制，目前的研究主要涉及Salmonella的毒力相关基因，包括inv、hut、stn、spv、fim、hilA等。沙门氏菌的侵袭蛋白(invasion protein，inv)是研究的热点，该蛋白决定细菌进入宿主上皮细胞的能力，与沙门菌的致病性密切相关，侵袭蛋白是由inv基因簇(invA、invB、invC、invD和invE等一组基因)编码，其中invA为沙门氏菌的主要毒力因子。研究表明invA基因是沙门氏菌A～E群高度保守基因，对人类致病的沙门氏菌99％属A至E群。且invA基因编码吸附和侵袭上皮细胞表面的蛋白，该蛋白决定沙门氏菌对肠粘膜细胞的侵袭力，invA基因适合致病性沙门氏菌的检测，但作为沙门氏菌属特异性基因有一定的确定，有漏检的可能。hut为编码组氨酸操纵子基因，高度保守。stn为编码肠毒素的基因。在不同血清型沙门氏菌的毒性质粒中存在一个10kb左右高度保守区域，毒性区域位于一个8.2kb片段中，具有一个操纵子和5个编码基因(spvR，spvA，spvB，spvC，spvD)。spy基因编码与沙门氏菌毒性质粒相关的毒力因子，与沙门氏菌的致病性有关。Fim是编码菌毛的基因，是沙门氏菌中高度保守的属特异基因。Hil是侵袭基因正调节蛋白的编码基因。上述基因常用于Salmonella的PCR检测鉴定。另外sdf基因作为肠炎沙门氏菌的种特异性基因常用于肠炎沙门氏菌的PCR检测鉴定。 

为了便于进行临床诊断、流行病学调查、食品中微生物检测及医院感染监控，微生物的分型与检测研究是必不可少的内容。目前，随着分子生物学的发展以及与流行病学的密切结合，分子分型技术以其敏感性高、特异性强、分型率和分辨率高等优点，在流行病学调查、食物中毒的预警和溯源、食源性疾病的诊断以及微生物的检测等方面发挥了重要的作用，并逐步替代了传统的生化分型和血清学分型技术，如重复序列PCR(rep-PCR)、随机扩增多态性DNA分析技术(RAPD)、限制性片段长度多态性分析(RFLP)、多位点序列分析(MLST)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)等。然而，上述方法操作起来都比较繁琐，程序比较复杂。因此，在上述分子分型方法的优点基础上，开发一种操作简便、价格低廉的分子分型方法将具有重要意义。 

发明内容

本发明以Salmonella属特异性基因invA、hut，毒性质粒基因spvR和肠炎沙门氏菌种特异性基因sdf为靶基因设计4个探针，通过“ε亚基抗体-链霉素-生物素-探针”系统将探针与F₀F₁-ATPase分子马达连接构建F₀F₁-ATPase分子马达生物传感器，进而与相应辅助试剂配套构建分子马达生物传感器分子分型试剂盒，从而对Salmonella是否携带毒性质粒以及是否为肠炎沙门氏菌进行分型判断，从而建立Salmonella的分子马达分子分型方法，为Salmonella的快速分型和溯源提供技术基础。