[发明专利]一种制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法

权利要求书

1.一种制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于：步骤如下：

1）、从中药提取物中制备高纯度山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷；

2）、将中药提取物溶于甲醇－水溶液，制得中药提取物溶液；

3）、采用分离纯化技术从中药提取物中制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷。

2.根据权利要求1所述制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于：所述中药提取物为银杏叶提取物，银杏叶提取物溶于25%－75%的甲醇－水溶液，制得银杏叶提取物溶液，银杏叶提取物浓度为10－1000mg/mL。

3.根据权利要求1所述制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于：所述分离纯化技术为二维液相色谱－质谱联用进行银杏叶提取物制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷；

液相色谱进行一维制备的色谱柱为反相C18，反相C8，Click OEG。采用液相色谱进行二维制备的色谱柱为反相C18，反相C8，Click OEG；

一维液相色谱制备采用的流动相为有机相与水相混合，洗脱条件按照有机相5－65%等度或0－50分钟有机相由5%提高到70%梯度进行；有机相为甲醇或乙腈，水相为水；

对保留时间5－25分钟主成分为山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的组分进行收集，旋转蒸发至干，作为一维制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品；将一维制备山奈酚-3--2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品用25%－75%的甲醇－水溶液溶解，至浓度为20－200mg/mL；

对一维收集浓缩后的样品，进行二维液相色谱制备。采用的流动相为有机相与水相混合，洗脱条件按照有机相5－15%等度或经0－30分钟有机相由5%提高到30%梯度进行，二维制备根据质谱选择离子指导组分收集；有机相为甲醇或乙腈，水相为水；

制备时流动相流速为60－120mL/min，制备时柱温为室温或25－40℃，制备时进样量为200－3000μL/针，检测器为DAD紫外检测器和质谱检测器；制备时流动相最佳流速为80－100mL/min，制备时柱温为室温，制备时进样量为2000－2500μL/针，紫外检测器为360nm；

二维液相色谱制备收集到的山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷馏分进行旋转蒸发浓缩至干，得到山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷化合物。

4.根据权利要求3所述制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于：所述一维制备最佳流动相为乙腈与水，采用梯度方式，乙腈比例由10%经15－20分钟增加到15%－25%。

5.根据权利要求3所述制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于：所述二维制备最佳流动相为乙腈与水，采用等度条件，乙腈浓度为8－15%，，二维制备质谱选择离子为m/z＝317和287，收集m/z=287的馏分。

6.根据权利要求3所述制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于：所述最佳二维色谱柱组合为一维为反相C18，二维为反相C18。

7.根据权利要求3所述制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于：所述制备时流动相最佳流速为80－100mL/min，制备时柱温为室温，制备时进样量为2000－2500μL/针，紫外检测器为360nm。