[发明专利]一株深绿木霉菌株及其在制备纤维素酶方面的应用

权利要求书

1. 一株深绿木霉B-8-1-34（Trichoderma atroviride B-8-1-34）菌株，其特征在于，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 6390。

2. 利用如权利要求1所述的保藏号为CGMCC No. 6390的深绿木霉B-8-1-34菌株在制备纤维素酶方面的应用，其特征在于，通过液态发酵实现：

⑴ 将菌种保藏号为CGMCC No. 6390的深绿木霉B-8-1-34活化后，制成浓度为10⁶～10⁸/mL的孢子悬液，按1～10%的接种量接入种子培养基中，26～32℃，150～220 rpm振荡培养，得种子液，然后将种子液以2～15%接种量接入液体发酵培养基中，初始pH4.0～6.0, 装液量为30～60mL/250mL，于26～32℃，150～220rpm摇床中培养60～96h；

⑵ 将步骤⑴获得的发酵液离心分离，取上清液作为粗酶液；

所述的种子培养基组成：羧甲基纤维素 1%，蛋白胨 0.2%，(NH₄)₂SO₄ 0.3%，MgSO₄ 0.04%，CaCl₂ 0.04%，KH₂PO₄ 0.1%，余量为蒸馏水，各组分以重量百分比计；

所述的液体发酵培养基组成：1～5%的玉米秸秆、玉米芯、稻草、稻壳、麦秸秆、高粱杆、木糖渣、甘蔗渣的单一成份或混合物，并添加麸皮0.05～3%、玉米浆0.05～5%，蛋白胨0.05～1.0 %或酵母粉0.05～1.0%的单一成份或一种以上成份；添加0.01～0.5% 硝酸钾、0.02～0.3% 磷酸二氢钾、0.01～0.08% 硫酸镁和0～0.05% 氯化钙；添加0.01～0.2mmol/L 的硫酸锰、硫酸亚铁或氯化钴，余量为蒸馏水，各组分以重量百分比计。

3.利用如权利要求1所述的保藏号为CGMCC No. 6390的深绿木霉B-8-1-34菌株在制备纤维素酶方面的应用，其特征在于，通过固态发酵实现：

(1)将菌种保藏号为CGMCC No. 6390的深绿木霉B-8-1-34活化后，制成浓度为10⁶～10⁸/ml的孢子悬液，将孢子悬液直接接种到固体培养基上或接种至种子培养基，于26～32℃，150～220rpm摇床中培养18～26h，得种子液；然后将种子液以2～15%接种量接种至固体发酵培养基培养；装瓶量为6～12 g/250mL, 料液比为1：1～2，于26-32℃培养, 定期翻料；

(2) 发酵60～120h，加入缓冲液浸提0.5～4h，浸提缓冲液为0.05 mol/L pH5.0的醋酸-醋酸钠缓冲液或0.05 mol/L pH5.0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，其加入量为固体物料重量的8～12倍，固液分离制备粗酶液； 

所述的种子培养基组成：羧甲基纤维素 1%，蛋白胨 0.2%，(NH₄)₂SO₄ 0.3%，MgSO₄ 0.04%，CaCl₂ 0.04%，KH₂PO₄ 0.1%，余量为蒸馏水，各组分以重量百分比计；

所述的固体发酵培养基组成：玉米秸秆、玉米芯、稻草、稻壳、麦秸秆、高粱杆、木糖渣、甘蔗渣的单一成份或混合物，原料粉碎后过40～60目筛，添加量为40～60%；添加麸皮2～40%、玉米浆5～40%、豆饼粉0.5～5%、硫酸铵0.3～3%、硝酸钾 0.01～1.0%、硝酸铵 0.01～1.0%、蛋白胨 0.01～1.0%或尿素0.01～1.0%的一种或两种以上混合物；添加磷酸二氢钾 0.2～2%，氯化钙 0.02～0.2%，七水硫酸镁 0.01～0.1%，各组分以重量百分比计。