[发明专利]一种海水纤毛虫体表纤毛的脱毛方法

说明书

技术领域

本发明属于动物学分类领域，具体地涉及一种海水纤毛虫体表纤毛的脱毛方法。

背景技术

海水纤毛虫病是海水养殖的重要疾病，能够引起鱼类、对虾和海参等多种经济海产动物发病，一些海水盾纤毛虫的大量寄生可以导致养殖动物的死亡。海水纤毛虫病的病原学和防治技术研究成为目前研究的热点。

对纤毛虫进行准确的分类是开展其生活史研究和疾病防控的基础。寄生性纤毛虫往往由于适应性特化，通常两侧高度扁平，体表纤毛密集而无分化，口器通常位于虫体一侧，其结构银染后难以观察和区分，为形态分类学研究造成了很大困难（龙红岸，2008）。

在本发明形成之前，未检索到海水纤毛虫体表纤毛的脱毛方法与技术的详细报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种海水纤毛虫体表纤毛的脱除方法，从而解决其口器观察难，形态分类学研究存在很大困难的技术问题。

本发明所采用的技术方案是：

一种海水纤毛虫体表纤毛的脱除方法，具体步骤如下：

a.将获得的海水纤毛虫置于重量比30‰的氯化钠(NaCl)溶液中，然后加入同体积的16%（体积比）乙醇溶液，使溶液中乙醇浓度为8%（体积比），用玻璃棒搅拌均匀后静置1~2分钟；

b.加入同体积的15‰（重量比）的氯化钠溶液，使溶液中乙醇的浓度为4%，用玻璃棒搅拌均匀后静置1~2分钟；

c.加入同体积的15‰的氯化钠(NaCl)溶液，使溶液中乙醇的浓度为2%，用玻璃棒搅拌均匀后即可完成脱毛过程。

本发明与现有技术相比的有益效果：

1、纤毛虫体体纤毛的脱毛率高，可以达到90%以上，虫体脱毛干净彻底，可清晰分辨纤毛虫的口器特征，并进行准确分类。

2、脱毛的技术流程简单，成本低廉。

3、该脱毛方法还可以扩展应用于其他淡水纤毛虫的体纤毛脱毛处理。

附图说明

图1脱毛处理前虫体形态结构（标尺ba r=10μm）；

图2脱毛处理后虫体形态结构正面观（标尺bar=10μm）；

图3脱毛处理后虫体口器形态结构(标尺bar=2μm)：M1小膜1，M2小膜2，M3小膜3,LA唇状凸起。

具体实施方式

下面以实施例详细叙述本发明的技术内容，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。

实施例：

2010年11月，山东胶南某刺参养殖场的刺参发生纤毛虫病，将患病的刺参放置于加冰的泡沫箱中运回中国水产科学研究院黄海水产研究所（青岛）进行虫体的脱毛处理。

脱毛方法：a.将获得的海水纤毛虫置于溶解了0.045克氯化钠(NaCl)的1500μl蒸馏水溶液中（即质量比为30‰的氯化钠溶液），然后加入1500μl的16%乙醇溶液，使溶液中乙醇浓度为8%，用玻璃棒搅拌均匀后静置1~2分钟；

b.加入3000μl的15‰的氯化钠溶液，使溶液中乙醇的浓度为4%，用玻璃棒搅拌均匀后静置1~2分钟；

c.加入6000μl的15‰的氯化钠溶液，使溶液中乙醇的浓度为2%，用玻璃棒搅拌均匀后即可完成脱毛过程。

完成脱毛后用Davidson’s AFA固定液（配方：1000ml固定液含：95%乙醇，330ml；福尔马林，220ml；冰醋酸，115ml）固定24h后，6000rmp/min离心5分钟，弃上清，收集底部离心获得的纤毛虫用光学显微镜或者扫描电镜观察脱毛效果和虫体口器结构。

随机在电子扫描显微镜下观察50只纤毛虫虫体，脱毛个体为48只，脱毛率为96%,脱毛前纤毛虫体表布满纤毛，口部结构难以观察，见图1，脱毛后虫体形态结构见图2，图2显示纤毛虫体表纤毛已经全部脱除。脱毛处理后虫体口器形态结构见图3，其中M1为小膜1，M2为小膜2，M3为小膜3,LA为唇状凸起，从形态分类上该纤毛虫属于纤毛动物门(Ciliophora)、寡膜纲(Oligohymenophorea)、盾纤亚纲(Scuticociliatia)、盾纤目(Scuticociliatida)、触毛亚目(Thigmotrichina)、鱼钩虫科(Ancistridae Issel)、后口虫属(Boveria Stevens)的具唇后口虫Boveria labialis。

本发明突破了体纤毛密集的海水纤毛虫口器观察难的技术瓶颈，对海水纤毛虫的准确分类、生活史研究和防治药物研发有重大实用价值。