[发明专利]一种琼脂糖4B微球的交联方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种琼脂糖4B微球的交联方法

背景技术

层析是一种被广泛使用的分离和纯化大分子物质的技术，而层析介质在层析系统中处于最为关键的位置。以天然多糖琼脂糖为母体的层析分离介质是经典的生物的分子分离材料，由于具有多孔性、亲水性、电中性、易衍生性等其它生物材料不可比拟的优点，使得其广泛应用于各种生物活性大分子的分离和纯化。但未交联的琼脂糖凝胶骨架结构是由氢键固定，为软基质，应用时易压缩，柱床反压较高，不能满足高流速层析的要求。

近年来，通过对琼脂糖微球的化学改性，一定程度上提高了凝胶的机械稳定性和通透性。有关琼脂糖微球的交联方法很多，目前所用交的联剂一般都是2，3-二溴丙醇、环氧氯丙烷、1，4-丁二醇二缩水甘油醚以及双官能团化合物，且大都足一步交联。然而2，3-二溴内醇毒性较强，不宜大量使用；环氧氯丙烷和1，4-丁二醇二缩水甘油醚的压力和流速关系的再现性很低，满足不了凝胶基质的刚性。因此很有必要对琼脂糖微球的交联试剂进行改变，寻找既含双官能团又分子链长的交联剂，以提高琼脂糖微球的机械性能。不但使其适合于实验室工作，也满足于工业需求的规模生产。

由于琼脂糖4B微球(琼脂糖含量为4％)含水量高，孔径大，可用于蛋白质等大分子的纯化分离，但机械强度比较差，使其应用受到巨大限制。虽不少文献报道了琼脂糖4B微球的交联方法，但仍不能满足工业压力和流速的需求。本发明采用二次交联法，其一次交联选用新的交联剂季戊四醇缩水甘油醚，二次交联采用环氧氯内烷交联，获得了刚性更强、结构更稳定的琼脂糖微球，能够耐受高温、高压、高流速等剧烈条件，明显提高了琼脂糖4B微球的应用范围。

季戊四醇缩水甘油醚是一种含有等价双官能团、分子链相对很长的交联剂，其用于琼脂糖凝胶的第一步交联，通过引入大分子链，将琼脂糖链上的非共价作用变为共价作用，增强结合力，稳定凝胶的网络相，再通过第二步环氧氯丙烷交联，进一步在基体中引入化学键力，使琼脂糖的刚性和稳定性都得到相当大的提高。

发明内容

本发明的目的是提供一种琼脂糖4B微球的交联方法

所述的琼脂糖4B微球的交联方法的步骤是：

(1)琼脂糖4B微球的一次交联

将琼脂糖4B微球和氢氧化钠混匀静止10min，依次二甲亚砜、无水乙醇、季戊四醇缩水甘油醚于30℃水浴摇床中搅拌，依次用20％的乙醇、丙酮、去离子水洗涤。

(2)琼脂糖4B微球的二次交联

将一次交联的琼脂糖4B微球和氢氧化钠混匀静止，后依次加入二甲亚砜、环氧氯丙烷，放到水浴摇床里，分别30℃、35℃、40℃各反应2h，依次用20％的乙醇、丙酮、去离子水洗涤。

二次交联后的琼脂糖4B微球装柱(柱内径1cm，装柱高度3cm)，连接到Purifier层析系统，随流速增加，柱压逐渐增大，当流速为400cm/h时，琼脂糖微球达到耐受极限柱压0.1MPa，变化趋势缓慢且呈良好的线性关系，说明合成的琼脂糖微球可在高流速下操作。二次交联后的琼脂糖4B微球经121℃、20min高温灭菌后，粒径和球形度都没有变化，损失率小于2.0％，这说明二次交联后的琼脂糖4B微球耐高温高压。

本发明在制备工艺上采用两步交联法，所开发的交联琼脂糖4B微球可进一步化学衍生，制得具有多种功能基团的色谱介质。本发明的优点在于一次交联后的琼脂糖4B微球即可承受一定的高温、高压，二次交联后的微球交联程度更高，适应于高压力、高流速的分析型色谱的操作要求；制备工艺简单，易于控制和放大；成本低廉，环境污染小。

附图说明

图1是本发明的琼脂糖4B微球的整体外观显微镜照片。

图2是本发明的二次交联后的琼脂糖4B微球整体外观显微镜照片。

图3是本发明的二次交联后的琼脂糖4B微球经高温灭菌后的整体外观显微镜照片。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步的描述：

实施例1

取40g琼脂糖4B微球于500mL的具塞三角烧瓶中，加入60mL、1.0mol/L的NaOH溶液，30℃静止10min，再依次加入32mL二甲亚砜、6mL无水乙醇和10mL季戊四醇缩水甘油醚，30℃，170rpm的水浴摇床中反应6h，依次用20％的乙醇、丙酮、去离子水洗涤。