[发明专利]一种从微生物发酵液中提取纤维素酶的方法

权利要求书

1.一种从微生物发酵液中提取纤维素酶的方法，其中，包括以下步骤：

步骤一、发酵液澄清，将产纤维素酶微生物发酵140～200h左右的发酵液进行压滤，得到发酵澄清液；

步骤二、单宁沉淀，将所述发酵澄清液加入搅拌罐中，以一定的转速进行搅拌，同时调节所述发酵澄清液的pH值至4.0～6.0，将一定量的单宁溶液加入搅拌罐中的发酵澄清液中，并持续搅拌一定时间，进行纤维素酶的沉淀；

步骤三、沉淀收集，将经过单宁沉淀的发酵澄清液进行压滤，收集沉淀，得到所述纤维素酶。

2.如权利要求1所述的从微生物发酵液中提取纤维素酶的方法，其中，步骤一中用板框压滤机进行压滤，包括以下步骤：

步骤一、一级压滤，将所述发酵液用装有5～10层纱布的板框压滤机进行压滤，得到一级滤液；

步骤二、二级压滤，将得到的所述一级滤液用装有1～10μm滤布的板框压滤机进行压滤，得到所述发酵澄清液。

3.如权利要求1或2所述的从微生物发酵液中提取纤维素酶的方法，其中，对步骤一中得到的所述发酵澄清液和步骤三中经单宁沉淀收集到的纤维素酶沉淀分别用滤纸酶活力测定方法测定其纤维素酶活力。

4.如权利要求1所述的从微生物发酵液中提取纤维素酶的方法，其中，所述单宁溶液的配置方法为：

按照每100L发酵澄清液中加入400-1000g单宁的比率，根据发酵液的体积，将相应量浓度为3～10g/L的单宁用柠檬酸缓冲液进行溶解，得到单宁溶液，其中，所述柠檬酸缓冲液pH值为4.0～6.0。

5.如权利要求1所述的从微生物发酵液中提取纤维素酶的方法，其中，步骤二中所述搅拌的转速为50～200r/min。

6.如权利要求1所述的从微生物发酵液中提取纤维素酶的方法，其中，步骤二中所述持续搅拌的时间为1～5h。

7.如权利要求1或4所述的从微生物发酵液中提取纤维素酶的方法，其中，步骤一中所述加入柠檬酸缓冲液的量为使所述单宁完全溶解的量。

8.如权利要求1所述的从微生物发酵液中提取纤维素酶的方法，其中，步骤三中可将收集的沉淀经真空冷冻干燥制得粉术状纤维素酶产品。

9.如权利要求1或8所述的从微生物发酵液中提取纤维素酶的方法，其中，所述真空冷冻干燥的条件是真空度为9～19Pa，温度为-45～-55℃，抽真空12～36h直至成粉术状无水分时为止。

10.如权利要求1所述的从微生物发酵液中提取纤维素酶的方法，其中，所述的调节pH的酸碱选择2mol/L浓度的H₂SO₄和NaOH。