[发明专利]生物灭蚊剂及其制备方法

权利要求书

1. 一种生物灭蚊剂，其特征在于：由灭蚊真菌与灭蚊细菌复配制得，以1g湿菌丝的灭蚊真菌计，配以灭蚊细菌苏云金杆菌以色列变种个数为1.4×10⁴～1.4×10¹⁸或配以灭蚊细菌球形芽孢杆菌的个数为2.5×10⁴～2.5×10²⁰。

2.如权利要求1所述的生物灭蚊剂，其特征在于：灭蚊真菌为贵阳腐霉或卡地腐霉。

3.一种生物灭蚊剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）采用SFE或KPYG2液体培养基摇床培养灭蚊真菌 5天，培养温度25℃±1℃，摇床转速120rpm；滤出菌丝，无菌水洗涤3次，加水至原体积，粉碎机高速粉碎10秒，备用； 

（2）配制1%～3%（W/V）海藻酸钠溶液；

（3）将灭蚊真菌菌丝悬液与海藻酸钠溶液按1:4比例混合，拌匀；

（4）将上述混合液缓慢滴入1%～5%（W/V）氯化钙溶液,微胶囊颗粒形成，沉淀，0.5～3小时后滤出微胶囊，清水冲洗备用；

（5）接种灭蚊细菌于灭蚊细菌液体培养基, 摇床培养，转速120rpm, 温度30℃±1℃；48小时后，离心收集芽孢，用时稀释至以下密度：1.4×10⁴～2.5×10²⁰，得芽孢悬液；

（6）按1～10ml细菌芽孢悬液/100g微胶囊的比例将芽孢悬液与微胶囊混匀，包装。

4.一种生物灭蚊剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）采用SFE或KPYG2液体培养基摇床培养灭蚊真菌 5天，培养温度25℃±1℃，摇床转速120rpm；滤出菌丝，无菌水洗涤3次，加水至原体积，粉碎机高速粉碎10秒，备用； 

（2）将准备好的灭蚊真菌菌液在无菌条件下加入BF培养基，每100克（湿重）培养基加菌液15ml,拌匀，静置培养，培养温度25℃±1℃； 

（3）采用灭蚊细菌液体培养基，接种灭蚊细菌，摇床培养48小时，摇床速度：120rmp, 培养温度30℃±1℃；将培养好的菌液在无菌条件下加入HF培养基，每100克（湿重）培养基加菌液15ml，拌匀，静置培养，培养温度30℃±1℃；

（4）5天后，将上述培养物按灭蚊真菌培养物:灭蚊细菌培养物=1:3的比例均匀拌在一起，包装。

5.如权利要求3或4所述的生物灭蚊剂的制备方法，其中KPYG2培养基的制备方法为：将1.5克蛋白胨、1.5克酵母粉 、3.0克葡萄糖、0.025克胆固醇、0.11克无水氯化钙、1.0克玉米油混合，加水至1000毫升，用时121℃灭菌30min。

6.如权利要求3或4所述的生物灭蚊剂的制备方法，其中SFE的制备方法为：生葵花籽100克加水1000毫升，粉碎，6层纱布过滤，滤液再加水至2000毫升；分装冷冻于-20℃，

用时，取出解冻，121℃灭菌30min。

7.如权利要求3或4所述的生物灭蚊剂的制备方法，其中灭蚊细菌液体培养基为Bti液体培养基，其制备方法为：将0.7g酵母膏、0.2g硫酸镁、1g蛋白胨、1g磷酸氢二钾、1g葡萄糖、和0.2g硫酸铵混合，加蒸馏水至1000ml，pH值为7.0-7.2，121℃灭菌30min。

8.如权利要求3或4所述的生物灭蚊剂的制备方法，其中灭蚊细菌液体培养基为Bs液体培养基，其制备方法为：将3.0g蛋白胨、5.0g牛肉膏、5.0g酵母膏、0.01g MnCl₂.4H₂O、0.1g CaCl₂.2H₂O、0.2g MgCl₂.6H₂O，加蒸馏水至1000ml，pH值为7.0-7.2，121℃灭菌30min。

9.如权利要求3或4所述的生物灭蚊剂的制备方法，其中BF培养基的制备方法为：米糠粉加面粉按1:1-3:1混合，再加蒸馏水拌匀，比例为60ml水/100g糠面混合物，121℃灭菌30分钟。

10.如权利要求3或4所述的生物灭蚊剂的制备方法，其中HF培养基的制备方法为：麦麸粉加面粉按1:1-3:1混合，再加蒸馏水拌匀，比例为60ml水/100g麸面混合物，121℃灭菌30分钟。