[发明专利]禽白血病J亚群病毒PCR检测用引物及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及用于检测禽白血病J亚群病毒的PCR检测用引物及检测试剂盒。 

背景技术

随着养禽业规模化养殖的不断深入，禽病的威胁也日益凸显。禽白血病(Avian Leukosis，AL）因其具有高感染率，在水平方向（鸡群之间交互感染）和垂直方向（该病能遗传给下一代）均能传播的特性，该病能感染所有鸡种，感染鸡群呈渐进性发病，持续的低死亡率，是危害养鸡业的主要疾病之一，全球每年因为禽类疾病而造成的经济损失高达数百亿元。 

但至今人类对禽白血病的防治几乎还无计可施，既没有疫苗可以利用，也没有有效的药物可以治疗，控制禽白血病的主要方法是通过病原检测，淘汰阳性鸡，净化种群。目前，国际上检测禽白血病病毒抗原最为理想的检测方法是ELISA法，它具有敏感性高、简便快捷、适用于大规模检测的特点。1979年以来，禽白血病的ELISA诊断试剂盒在国外已实现商品化，尤其近年来，我国陆续培养建立了数家SPF鸡场，今后还会不断增加，对SPF鸡群AL／SV-gs抗原检查目前主要依靠进口试剂盒，不仅价格昂贵而且不方便。因此，研制较先进的国产试剂盒是我们当前急需要解决的问题。 

禽白血病是由禽白血病肉瘤病毒群中的病毒引起的鸡多种肿瘤性疾病的统称。以在成年鸡中产生淋巴样肿瘤和产蛋量下降为特征。禽白血病病毒的多数毒株能在11～12日龄鸡胚中良好生长，腹腔或其他途径接种1～14日龄易感雏鸡，可引起鸡发病。临诊上有多种表现形式，主要是淋巴白血病。禽白血病病毒目前来讲可分为A、B、C、D、E和J六个亚群。其中J亚群是90年代后在肉鸡中新发现的， 是目前常见的具有致病性的病毒亚群。禽白血病病毒感染鸡只后，会降低鸡的生长和生产性能，或引起鸡出现严重的病理反应，甚至死亡，该病毒除了能通过髓细胞瘤在肉鸡引起较高死亡率外，还可引起鸡体重质量严重下降，严重情况下会引起鸡群爆发其他并发症，从而引起鸡群的大面积死亡。另外的五种亚群(A、B、C、D、E）能检测到病毒但是通常鸡只不发病。J亚群禽白血病是由反转录病毒科J亚群禽白血病病毒引起的一种传染性致骨髓细胞瘤疾病或成髓性白血病。该病自发现以来，以垂直和水平传播两种形式在世界各国肉种鸡、商品肉用型鸡及蛋种鸡中广泛流行，引起肉种鸡死亡和消瘦，严重生长发育不良，蛋鸡发生机体免疫抑制，繁殖性能持续降低，给世界各国养鸡业带来了极大的危害，因此对集约化养殖的鸡群进行J亚群病毒感染的检测，对养鸡业的发展具有重要意义。 

高感染率的禽白血病严重制约着养禽业的发展，并威胁着大规模养殖化的推广。因此，一种能快速、低成本、准确的检测大规模鸡是否感染禽白血病病毒的方法，对养殖业的发展具有重要意义。 

目前对于禽白血病的检测常采用ELISA试剂盒进行检测，其准确性较高，但有两大缺点：1）价格非常昂贵，不适用于养殖场全群检测；2）ELISA试剂只能检测出外源性的禽白血病病毒，并且不能区别病毒各亚群。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种禽白血病的PCR检测用引物。 

本发明的另一目的在于提供检测禽白血病的试剂盒。 

本发明提供了一种禽白血病病毒PCR检测用引物，其能对禽白血病病毒的env基因进行扩增，生成禽白血病病毒特异性扩增片段。 

优选地，所述引物核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。 

本发明提供了含有上述引物的诊断试剂。 

本发明提供了含有上述引物的检测试剂盒。 

本发明提供了上述引物在制备禽白血病J亚群病毒诊断试剂盒检测试剂盒中的应用。 

本发明提供的检测禽白血病J亚群病毒的试剂盒，其检测步骤为： 

检测步骤为： 

1）分别抽取10~50只禽血液，个体DNA抽提后混合得到混合DNA； 

2）将步骤1）的混合DNA应用引物进行PCR扩增，根据扩增目的条带判断；若样品扩增条带出现525bp的片段，则样品为禽白血病J亚群病毒感染阳性样品；若扩增条带没有525bp片段，则为阴性；所述引物序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。