[发明专利]人退变椎间盘软骨终板干细胞、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种人软骨终板干细胞，其是从人退变椎间盘软骨终板中分离出的具有多向分化潜能的干细胞，其特征在于:①在标准的培养条件下能贴塑料瓶壁生长；②细胞表面标志物能表达CD105、CD73、CD90，不表达CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79alpha或CD19及HLA-DR表面分子； ③在体外培养能向骨细胞、软骨细胞及脂肪细胞方向分化，且较骨髓间充质干细胞表现出更强的成骨和成软骨分化能力。

2.权利要求1所述干细胞的制备方法，其包括以下步骤：

步骤1：对软骨终板标本组织进行分离获得软骨终板，用机械-胶原酶法获取软骨终板原代细胞,体外扩增时并筛选、纯化，将获取到的细胞置孵箱培养，每3天换液1次；

步骤2：待细胞融合达90%时,对软骨终板细胞消化传代,运用琼脂糖筛选系统筛选细胞,得到较高纯度的软骨终板干细胞，再置于孵箱培养，进行扩增；

步骤3：将传至第3代的细胞进行冻存备用，需要应用时将该细胞复苏即可。

3.权利要求1所述人软骨终板干细胞在制备治疗椎间盘退变性疾病的组织工程髓核中的应用。

4.权利要求1所述人软骨终板干细胞在制备治疗椎间盘退变性疾病的组织工程髓核中的应用，所述组织工程髓核是将人软骨终板干细胞与支架材料复合而获得，人软骨终板干细胞的用量为>1×10⁵/ml。

5.根据权利要求3或4所述人软骨终板干细胞的应用，其特征在于：所述椎间盘退变性疾病包括椎间盘源性腰痛、椎间盘源性颈肩痛，还可用于经磁共振及椎间盘封闭等手段可明确责任椎间盘病例、腰椎间盘或颈椎间盘髓核摘除术后病例、术后残留腰痛及颈肩痛且可以明确手术椎间盘为责任椎间盘病例。

6.根据权利要求4所述人软骨终板干细胞的应用，其特征在于：所述组织工程髓核是将人软骨终板干细胞体外培养扩增并经筛选后，复合海藻酸钠而形成，在X线引导下行目标椎间盘穿刺注射。