[发明专利]一种具有抗过敏活性的大枣中环磷酸腺苷的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从大枣中提取具有抗过敏活性环磷酸腺苷的方法

背景技术

枣树是我国特有的一种果树，我国的枣树栽培面积占全世界栽培总栽培面积的95％以上。大枣是一种常用中药，大枣中环磷酸腺苷(cAMP)含量为100～600nmol/g，在180多种天然植物中含量最高。“环磷酸腺苷”(简称cAMP)具有扩张血管和抗过敏作用，过敏性患者大多是由于人体细胞内cAMP浓度下降，环磷酸鸟苷(cGMP)浓度增高，cAMP和cGMP比值偏低所致。cAMP和cGMP是存在于机体的一对重要的环核苷酸酶，广泛存在于一切细胞中，在生命活动以及疾病的发生和发展过程中起着重要的作用。大枣内含有丰富的cAMP和cGMP活性物质，当cAMP活性物质被消化道吸收，分布到末梢组织，这些组织内cAMP与cGMP的比值将呈显著持续的增高，使得免疫细胞中的环磷酸腺苷的量增加，进而可以对抑制过敏免疫反应有良好的效果。环磷酸腺苷可以通过化学合成、生物发酵、天然产物分离提取等方法获得，但是化学合成所用溶剂有一定的毒性，易污染环境，生物发酵菌种限制且难以分离，而植物尤其是大枣中cAMP含量是目前所知中最高的，如何从天然产物中较简便的分离出cAMP，是当前研究所要解决的主要问题。

目前关于天然来源cAMP提取物的发明专利国内外都比较少，国内的刘孟军、王永惠等以及国外的Truelsen TA等测定了多种植物中的cAMP的含量，其中大枣以38nmol/g居首位。目前国内关于大枣中cAMP的提取方法比较常用的有Hanabusa K等利用溶剂浸提的方法从大枣中提取cAMP，李明润等通过三次阴离子交换柱层析和一次氧化铝层析提取cAMP。但是提取工艺繁琐、提取成本较高、提取效率低且提取过程中糖分没有被完全提取出来。因此，从提高提取效率、降低工艺成本、加强综合利用等方面来看，现有的生产工艺都需要大力提高。这对环磷酸腺苷的工业化生产具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是充分利用我国丰富的大枣资源，深层挖掘大枣以及枣中cAMP抗过敏的保健价值，具有工艺简单、提取率高、成本低、原料丰富等特点。

为实现上述目的，本发明由以下步骤组成：

1)将筛选后的大枣原料进行去皮、去核、洗涤、粉碎等预处理，利用乙醇进行闪式提取。提取液冷却至室温后通过抽滤、浓缩、静置得到澄清透明枣汁。

2)将澄清提取液通过装有大孔树脂的树脂柱进行吸附，根据饱和吸附试验的结果确定采用HPD-400型树脂。在一定pH值下通过适宜浓度的乙醇洗脱液进行梯度洗脱，收集洗脱液。

3)将洗脱液收集，经过真空浓缩，浓缩至原体积的1/3，加入无水乙醇，静置、过滤并通过真空冷冻干燥得到大枣cAMP提取物粉末。将得到的大枣cAMP提取物进行Elson-Morgan法抗过敏检测，得到其抗过敏抑制率。

步骤1)所述的乙醇水溶液的浓度为40％～70％。

步骤1)所述的料液比为1∶20～30。

步骤1)所述的提取时间为20～40s。

步骤2)所述的pH值为4.0～5.5。

步骤2)所述的洗脱流速为2～4BV/H。

步骤2)所述的洗脱乙醇浓度为40～70％。

步骤3)Elson-Morgan法抗过敏检测透明质酸酶活性为500-800U/mL。

一般植物提取过敏抑制率达到50％即认为有抗过敏效果，而本产品抑制率达到76.2％。

附图说明

下面对附图进行简要说明。

图1是大枣环磷酸腺苷通过闪式提取、纯化并进行抗过敏活性检测的工艺流程图。

图2是样品浓度在0～30mg/mL范围内的环磷酸腺苷抗过敏活性检测抑制率图。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发明的范围。

实施例1：

取100g大枣进行去皮、去核、洗涤等预处理后，加入60％的乙醇溶液放入闪式提取器进行闪式提取，提取时间为40s，料液比为1∶20。提取液冷却至室温后通过抽滤、浓缩、静置得到澄清枣汁。在内径为1.5cm的交换柱内装入大孔吸附树脂HPD-400，大枣闪提液上柱后除杂(去离子水)，pH＝4.5，吸附以及洗脱流速为4BV/H，选择40～70％乙醇溶液为洗脱液进行梯度洗脱，收集洗脱液。洗脱液经过浓缩、真空冷冻干燥后测定cAMP的提取率为135.24ug/g。

实施例2：