[发明专利]木霉菌厚垣孢子生物农药水分散粒剂及其制备

说明书

技术领域

本发明属于生物农药和生物化学技术领域。

背景技术

随着经济发展和环境可持续发展的要求，寻找新的、符合农业可持续发展的农业病害防治措施成为当前农业生产研究的热点。由于生物防治无污染、无残留的优点引起人们的关注。目前生防菌株以及活性抗菌成份的研究和开发成为新型生物农药竞争的焦点。

木霉菌是一类重要的生防真菌，目前市场上的木霉制剂均是分生孢子制剂和菌丝型制剂，多是由固体发酵而来，如以色列的Makhteshim Agan公司的Trichodex，可用于防治灰霉病。我国也有类似的产品登记，如特立克和灭菌灵。但是其生产量不大，在市场上的占用率很低。虽然固体发酵产物可以直接施用，后处理简单，成本低，但是将其大规模用于植物病害的防治还存在着一些问题。以分生孢子为活性成分的制剂，保质期一般只有3个月左右，从而导致田间防效稳定性得不到保证，在植物病害防治中尚不能完全发挥作用。可见，木霉生物农药制剂的货架期短，是目前生物农药生产和应用的瓶颈。常见的木霉分生孢子制剂主要为可湿性粉剂，在使用过程中，存在粉尘飞扬的缺点。厚垣孢子是木霉菌抵抗不良环境而产生的一种休眠结构，具有耐干燥、耐低温、对土壤抑菌作用不敏感及存活期长等优点，因此，厚垣孢子的研究必将丰富木霉菌的研究领域，使木霉菌的研究与应用更深入更广泛，木霉厚垣孢子制剂的商品化开发已成为木霉菌研究的一个趋势。尽管如此，先前的研究尚未突破制备高浓度厚垣孢子的培养方法，尤其是液体发酵方法，寻找适宜的发酵培养条件以求得到高生物量的厚垣孢子，制备厚垣孢子水分散粒剂等可以延长菌剂的保存时间，增加木霉菌的利用价值，是目前亟待解决的问题。

水分散粒剂(Water Dispersible Granules)是在20世纪80年代研制而成的化学农药新剂型，是通过向可湿性粉剂中加入粘结剂和崩解剂后制成的。它有溶于水后快速崩解分散，兼有可湿性粉剂和水悬浮剂的优点，同时克服了可湿性粉剂的粉尘污染和悬浮剂的物化性质不稳定等缺点。水分散粒剂由活性成分、湿润剂、分散剂、崩解剂、稳定剂、粘结剂及载体等组成，粒径200～5000um，入水后能迅速崩解、分散，形成高悬浮分散体系。一般化学农药对水分散粒剂的相关载体和助剂要求不高，但生物制剂由于是以活菌体为活性成分，所以在载体和助剂的筛选过程中要充分考虑载体和助剂的生物相容性和储存稳定性。

助剂在水分散粒剂的形成和使用性能上有决定性作用。水分散粒剂由活性成分、助剂、载体等经过混合，粉碎后造粒而成。在造粒过程中，需要粘结剂的粘合作用，放入水中时需要润湿剂的润湿和崩解剂的快速崩解，以及通过分散剂形成高悬浮的分散体系。对于制备生物农药水分散粒剂，不仅要筛选高性能的专用助剂并使其有很好的配伍性，而且还要有良好的生物相容性，以防出现生物降解、储藏稳定性降低等问题。目前，生物农药助剂的筛选主要为各种改善制剂物理化学性能、提高生物防治效果以及保护生防因子的各种添加剂，如润湿剂、分散剂、保护剂、粘结剂、崩解剂、增效剂等。

发明内容

选用的木霉菌菌种为绿色木霉(Trichoderma viride)，哈茨木霉(Trichoderma haziamum)，康氏木霉(Trichoderma konigii)和黄绿木霉(Trichoderma auxeoviride)。这些木霉菌菌种一些已经登记进入市场，均可以从市场或有关单位买到。

将分离纯化的木霉菌菌种在PDA培养基上28℃下培养6天，产生大量绿色分生孢子。用接种环将木霉菌分生孢子转移到含无菌水的试管中，搅拌使分生孢子从菌丝上分散下来，用无菌纱布过滤除去菌丝后，将孢子浓度调节至107cfu/mL，按照1％的接种量接种到液体培养基中，液体培养基由可溶性淀粉，碳酸钙，麦麸，硫酸铵和磷酸二氢钾以及大豆油等按比例组合制成，接种后在28℃发酵培养7天，获取制备大量木霉菌厚垣孢子，而后将木霉菌发酵液通过吸附剂吸附后制成水分散粒剂。

本发明的核心技术是通过液体培养基发酵生产大量木霉菌厚垣孢子，将发酵培养液用吸附剂吸附形成母液，加入活体微生物保护剂、崩解剂和粘接剂混合均匀，然后通过挤压造粒制得水分散粒剂。

上述所用的培养基和分散粒剂成分的材料均可以从市场上购买。

采用木霉菌厚垣孢子加工成的水分散粒剂，由于木霉菌厚垣孢子在贮藏期间处于休眠状态，受外界不良条件干扰少，制成的水分散粒剂贮藏性能得到了提高，可以在常温下长时间贮藏。

本发明解决的技术问题是木霉菌生物农药的稳定性，使木霉菌生物农药可以长期贮藏，稳定发挥功效。

具体实施方案