[发明专利]一种细胞保存液

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞保存液。 

背景技术

细胞，是生命最基本的单位，在很多方面均具有应用价值。干细胞(stem cells,SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。间充质干细胞【mesenchymal stem cells,MSC】是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。 

与普通的生物制品和药品不同，细胞制品中，维持细胞活性是一个极大的挑战。生理盐水作为常用的输注介质，在临床应用上方便安全，但是细胞在生理盐水中活性的下降速度非常快，10小时之内细胞的活性丧失就达到30％之多，因此只适合细胞短暂保存，即时输注。血浆可以较好的维持细胞活性，但是，血浆中含有大量未知成分，异体输注存在安全隐患，同体输注则成本极高。 

申请号：200510112642.1，发明名称：“细胞保存液及其调制方法、细胞保存方法、细胞培养方法”的专利申请公开了不含血浆的细胞保存液，如，由葡萄糖5.5mM、钠离子143.8mM、钾离子5.4mM、碳酸氢根离子和/或碳酸根离子23.7mM、钙离子1.8mM、镁离子0.8mM、氯化物离子130.8mM、磷酸根离子1.0mM、硫酸根离子0.8mM和纯水组成的保存液1；由甘露醇5.5mM、钠离子143.8mM、钾离子5.4mM、碳酸氢根离子和/或碳酸根离子23.7mM、钙离子1.8mM、镁离子0.8mM、氯化物离子130.8mM、磷酸根离子1.0mM、硫酸根离子0.8mM和纯水组成的保存液2。用通常作为细胞保存液的磷酸缓冲液和生理盐水（含有2.5%v/v人白蛋白）与前述保存液1和保存液2保存细胞4天后，细胞存活率分别为26.9%、11.9%、73.6%和39.8%。 

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了另一种不含血浆的细胞保存液，以及该保存液的制备方法和细胞的保存方法。 

本发明细胞保存液，它包含如下成分：NaCl 120~137mM、KCl2.2~2.8mM、柠檬酸钠3~9mM、葡萄糖15~20mM、CaCl₂ 0.6~1.2mM、1.5~3.5%（w/v）白蛋白、0.3~0.8%（w/v）氨基酸和0.015~0.035%（w/v）维生素。 

本发明所述维生素是指市售的注射用水溶性维生素，含有如下重量配比的组分：维生素B13.0份；维生素B23.6份；烟酰胺40份；维生素B64.0份；泛酸15份；维生素C100份；生物素60×10^-3份；叶酸0.4份；维生素B125.0×10^-3份；甘氨酸300份；乙二胺四乙酸二钠0.5份；对羟基苯甲酸甲酯0.5份。 

优选地，它包含如下成分：NaCl 125~132mM、KCl 2.4~2.6mM、柠檬酸钠5~7mM、葡萄糖16.5~18.5mM、CaCl₂ 0.8~1.0mM、2.0~3.0%（w/v）白蛋白、0.4~0.6%（w/v）氨基酸和0.02~0.03%（w/v）维生素。 

进一步优选地，它包含如下成分：NaCl 128mM、KCl 2.5mM、柠檬酸钠6mM、葡萄糖17.5mM、CaCl₂ 0.9mM、2.5%（w/v）白蛋白、0.5%（w/v）氨基酸和0.025%（w/v）维生素。 

所述细胞保存液还还包含15~25mM甘露醇。优选地，所述甘露醇的浓度为18~22mM。进一步优选地，所述甘露醇的浓度为20mM。 

所述保存液的pH为7.0~7.4，渗透压为280~320mOsm/L。 

本发明保存液的制备方法，它包括如下步骤： 

（1）取前述配比的原料； 

（2）将步骤（1）的原料配制成溶液，灭菌，即可。