[发明专利]日本沼虾MnIAG基因、其扩增引物组及扩增方法无效
| 申请号： | 201210422533.X | 申请日： | 2012-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN103397037A | 公开（公告）日： | 2013-11-20 |
| 发明（设计）人： | 沈怀舜;柏爱旭;任秀芳;周鑫 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/16 | 分类号： | C12N15/16;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 楼高潮 |
| 地址： | 214081 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 日本 mniag 基因 扩增 引物 方法 | ||
1.一种日本沼虾MnIAG基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
2.一种用于扩增如权利要求1所述的日本沼虾MnIAG基因的引物组，其特征在于由如下引物组成:
IAG正向简并引物IAG-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
IAG反向简并引物IAG-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
3′ 正向外引物 3aMnIAG-F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；
3′ 正向内引物 3aMnIAG-F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
5′ 反向外引物 5aMnIAG-R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；
5′ 反向外引物 5aMnIAG-R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
3.一种扩增如权利要求1所述日本沼虾MnIAG基因的方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤1：获得日本沼虾促雄性腺组织的总RNA；
步骤2：将已公开的几种甲壳类IAG基因进行序列比对，找出保守序列，设计如权利要求2所述简并引物对，PCR扩增得到MnIAG基因的保守序列；
步骤3：以所述MnIAG基因保守序列作为模板，设计如权利要求2所述引物组，扩增获得日本沼虾MnIAG基因的3′ 端和5′端片段；
步骤4：将所述MnIAG基因保守序列、所述MnIAG基因的3' 端和5' 端片段拼接，即得。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在步骤3所述扩增为套式两轮PCR。
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