[发明专利]一种分离纯化EPA和DHA的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及海洋生物中脂肪、油等生物分子提取分离技术领域，具体涉及一种分离纯化EPA和DHA的制备方法。

背景技术

1978年Dyerberg等首次报道格陵兰爱斯基摩人的心血管发病率低与食鱼有关，鱼油中EPA和DHA引起了人们的重视。大量研究证实，EPA、DHA具有降血脂、抗血小板聚集、缓和血栓形成、保护脑血管等作用，尤其是DHA还可以增加大脑功能，提高辨别力，增强记忆力和注意力。在大脑和视网膜上DHA还可通过膜联蛋白的活性对神经细胞核视网膜光感受中的结构和功能发生作用，这有助于胎儿、婴幼儿大脑椎体细胞核视网膜杆细胞生长、发育，孕妇服用DHA有助于胎儿脑细胞发育，特别是早产儿服用DHA以维护其视杆细胞的正常发育，保证不致产生由于缺少DHA所造成的视力减弱的遗憾。由于EPA、DHA的功效显著，含DHA、EPA的产品大量上市，但现售产品由于含量不高，杂质较多，服用后会引起过氧化物中毒、腹泻、消化不良，儿童服用会引起性早熟，服用剂量大等副作用，尤其不利于婴幼儿服用。

为了提高EPA、DHA纯度，国内外学者和生产厂家进行了广泛地研究。现在主要的分离方法有：脂肪酶法、低温结晶法、金属盐沉淀法、减压分馏法、硝酸银溶液萃取法等。但是，以上现有技术中的方法或因成本较高或因操作复杂都不能轻易的到高纯度的DHA、EPA产品。

发明内容

本发明的目的在于针对目前在分离纯化DHA、EPA过程中所存在的成本高、操作复杂以及纯度不高的问题，提供一种采用半制备SFC分离系统制备高纯度DHA、EPA单体的新方法，该方法包括以下步骤：

a.将含EPA和DHA混合物的鱼油提取物粗品用甲醇或乙醇溶解，样品浓度为1-200mg/ml，具体实施时，可根据实际溶解效果进行调整，过滤除去微小的固体不溶物，得到滤液作为分离粗品；

b.采用分析型SFC优化EPA和DHA单体的最佳分离洗脱条件，将其等比例放大，应用在填充硅胶填料的色谱柱上进行分离，在线收集EPA、DHA对应谱带的馏分；

c.将步骤b中收集的EPA、DHA对应谱带的洗脱液中的溶剂蒸干，即可得到色谱纯为99.2%的EPA、DHA。

本发明的有益效果是可直接采用含EPA和DHA混合物的鱼油提取物粗品来制备EPA、DHA单体，使用CO₂作为主要流动相，绿色环保，不用或使用少量有机试剂作为改性剂，生产成本低，且后处理简单，适用于大规模制备。

具体实施方式

实施例1

1.取含EPA和DHA混合物的鱼油提取物粗品，甲醇溶解，样品溶度为5mg/ml，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；

2.将样品溶液注入半制备SFC分离系统，色谱柱尺寸为Φ10×250mm，C18填料，粒径为5~45um，上样量10mg，CO₂流速为0.8~3.0ml/min，甲醇作为改性剂，流速为0~0.5ml/min，温度为40℃，背压为9~15MPa。采用的紫外光度检测器的检测波长为210nm，收集保留时间在5~27min(与EPA对应)和6~30min(与DHA对应)的馏分，经HPLC分析纯度≥99.8%。

实施例2

1.取含EPA和DHA混合物的鱼油提取物粗品，甲醇溶解，样品溶度为10mg/ml，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；

2.将样品溶液注入半制备SFC分离系统，色谱柱尺寸为Φ10×250mm，C18填料，粒径为5~45um，上样量20mg，CO₂流速为1.0~5.0ml/min，甲醇作为改性剂，流速为0~1.0ml/min，温度为40℃，背压为9~15MPa。采用的紫外光度检测器的检测波长为210nm，收集保留时间在5~25min(与EPA对应)和6~30min(与DHA对应)的馏分，经HPLC分析纯度≥99.5%。

实施例3

1.取含EPA和DHA混合物的鱼油提取物粗品，甲醇溶解，样品溶度为10mg/ml，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；

2.将样品溶液注入半制备SFC分离系统，色谱柱尺寸为Φ25×250mm，C18填料，粒径为5~45um，上样量50mg，CO₂流速为1.0~10.0ml/min，甲醇作为改性剂，流速为0~2.0ml/min，温度为40℃，背压为10~18MPa。采用的紫外光度检测器的检测波长为210nm，收集保留时间在5~25min(与EPA对应)和6~30min(与DHA对应)的馏分，经HPLC分析纯度≥99.7%。