[发明专利]葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，涉及一种超抗原检测的试剂盒，特别是一种金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，该试剂盒利用了双抗体夹心化学发光酶联免疫试验来定量检测环境、食品和体液中如河水、牛奶、尿液和血液中的金黄色葡萄球菌肠毒素A含量。

背景技术

金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌，该菌广泛存在于空气、水、尘埃及人和动物的排泄物中。据美国疾病预防控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒仅次于大肠埃希菌，居第二位，占细菌性食物中毒的33％。加拿大报告的发生率更高，占细菌性食物中毒的45％。我国每年发生此类中毒事件也非常多，全国各地均有报告，是疾病预防控制部门重点监测的疾病之一。另外，金黄色葡萄球菌还能导致其他的疾病，在世界范围内，金黄色葡萄球菌是主要的医院内感染菌，是引起化脓性感染的重要病原菌。据国际最新文献报道，金黄色葡萄球菌肠毒素A在引起败血症和脓毒血症的毒素中所占比例最高，约占30%。金黄色葡萄球菌肠毒素是金黄色葡萄球菌产生的主要致病物质之一。依据金黄色葡萄球菌肠毒素的血清型不同，可分为A、B、C、D、E、F、G、H、I和J等10个毒素血清型。由于SE具有很强的热稳定性，被金黄色葡萄球菌污染的食物经过加热处理后，虽然细菌可被杀死，但其已产生的金黄色葡萄球菌肠毒素仍然具有致病能力。因此，在食品卫生检测中，金黄色葡萄球菌肠毒素的检出是确定食物被金黄色葡萄球菌污染的决定因素。在各型金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒中，75%以上是金黄色葡萄球菌肠毒素A引起，其次依次是金黄色葡萄球菌肠毒素D、金黄色葡萄球菌肠毒素C和金黄色葡萄球菌肠毒素B。因此，在食品以及败血症和脓毒血症的人体血清中对金黄色葡萄球菌肠毒素A进行检测成为监控金黄色葡萄球菌肠毒素A中毒的必要手段。

目前，检测金黄色葡萄球菌肠毒素A主要有免疫琼脂扩散法、反向间接血凝法、免疫芯片法和酶联免疫吸附法等。免疫琼脂扩散法和反向间接血凝法的缺点是费时、影响分析的干扰因素较多、特异性差。免疫芯片法存在价格昂贵，操作人员需要经过专业培训，影响分析的干扰因素较多等不足。酶联免疫吸附法有时检测敏感性不够。鉴于此，建立一种金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，快速、特异、灵敏的检测金黄色葡萄球菌肠毒素A具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种食品及血清中的金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，适合于快速检测定量食品及血液中的金黄色葡萄球菌肠毒素A，具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒的内容物包括有：抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的单克隆抗体，辣根过氧化酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体溶液，金黄色葡萄球菌肠毒素A系列标准溶液，包被溶液，洗涤溶液，封闭溶液，化学发光溶液，以及化学发光酶联板；其中：

所述化学发光酶联板各孔包被抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的包被抗体，其中所述包被抗体浓度优选2.5μg/mL。

所述化学发光酶联板优选乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光酶联免疫板。

所述金黄色葡萄球菌肠毒素A系列标准溶液分别是0.0025ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.02ng/mL、0.04ng/mL、0.2ng/mL、1ng/mL。

所述检测金黄色葡萄球菌肠毒素A的检测抗体为辣根过氧化物酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A小鼠单克隆抗体原液，酶标金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体工作浓度优选为1:4000。

所述包被溶液是1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠溶于1L去离子水中的混合液，pH为9.5；

所述封闭溶液是每升溶液中含体积分数为0.05的新生牛血清、pH 7.40.15mol/L的磷酸盐缓冲液；

所述洗涤溶液是含有体积分数0.0005吐温-20，pH 7.4、0.15mol/L的磷酸盐缓冲液；

所述化学发光溶液是0.01M鲁米诺与pH8.8，0.001M对甲苯酚的三羟甲基氨基甲烷溶液和体积比为3：10000H₂O₂的混合液。

在制备抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体的基础上，经过配对抗体的筛选，建立化学发光酶联免疫分析方法，用来定量检测食品及血液中的金黄色葡萄球菌肠毒素A。