[发明专利]异种骨材料的脱脂、脱蛋白处理方法及异种骨移植替代材料的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种骨材料的处理方法及骨移植替代材料的制备方法，尤其涉及一种异种骨材料的处理方法及异种骨移植替代材料的制备方法。

背景技术

在骨外科的临床工作中，由于创伤、肿瘤、炎症以及发育异常等其他原因常会导致骨缺损，引起肢体的功能丧失，影响人们的生活质量。骨移植是治疗骨缺损最常用的方法，其中传统自体骨移植是临床上治疗骨缺损的最有效手段，但自体骨移植是以牺牲健康组织为代价，会导致供骨区出现附加的手术损伤以及疼痛、血肿、骨折等并发症；且自体骨来源和能获取的骨量均非常有限，极大地限制了其在临床上的应用。同种异体骨移植是修复骨缺损的另一常见的方法，其愈合过程与自体骨移植基本上相同，其来源也同样有限，且潜在的疾病传播和并发感染的现象是其在临床使用最大的风险之一。近年来，临床上使用较多的人工材料骨，具有加工容易、腐蚀性小、价格便宜等优点，但人工骨没有骨诱导作用、耐磨性差，其孔隙结构、降解能力及生物性能远不及天然骨。因此，寻找理想的骨移植替代材料，是骨科学、材料学及相关学科长期面临的艰巨挑战和重大课题。

异种骨具有天然的多孔结构以及与人骨的力学性能相近等优点，其天然的骨小梁结构更符合生物力学性能，且其来源广泛，价格低廉，易于大量获取，具有其他人工合成材料难以比拟的优势，符合骨移植替代材料的要求。但是，异种骨的抗原成分来源广泛且复杂，异种骨种属差异性大，如不经过处理直接植入人体内，必然会产生强烈的免疫排斥反应，因此我们必须降低甚至完全消除异种骨的抗原性，这是异种骨移植替代材料制备过程中的核心问题。

为制备令人满意的异种骨移植替代材料，很多科研工作者曾尝试了多种不同的方法来去除异种骨中的抗原，譬如，深低温冷冻、高温煅烧、γ射线辐照、强氧化剂等方法来减弱或消除异种骨的抗原。上述各种方法虽然都能在一定程度上减弱异种骨的免疫原性，但在去除异种骨抗原的过程中，同时也去除了Ⅰ型胶原等重要的有机成分，破坏了骨中的I型胶原支架结构，严重影响了异种骨的生物力学性能、骨传导及骨诱导性能，而且杂蛋白的去除也并不彻底。因此，找到一种既能脱除异种骨中引起免疫反应的抗原，同时又保留其良好成骨能力和力学性能的制备方法，是异种骨移植替代材料研究中需要解决的关键问题。

此外，目前最常用的对异种骨的脱脂方法是采用体积比为1∶1的甲醇和氯仿混合液进行脱脂，但这种脱脂方法脱除脂肪的效率并不高，残存的脂肪会具有抗原性，并且甲醇、氯仿均有神经毒性、肾毒性、肝毒性、致癌性和致畸性等，属于中毒性溶剂，因此，现有对异种骨的脱脂技术也需要进一步改进。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种原料来源广泛、加工制作简单、成本低、脱脂效果好的异种骨材料的脱脂处理方法和脱蛋白处理方法，还提供一种原料来源广泛、加工制作简单、成本低、产品具有低抗原性、较好的骨传导性及生物力学性能的异种骨材料的异种骨移植替代材料的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为一种异种骨材料的脱脂处理方法，所述脱脂处理方法是采用石油醚索氏抽提法，所述脱脂处理方法具体包括以下步骤：取新鲜的异种骨条并用滤纸包好，将包含异种骨条的滤纸筒放入索氏提取器的抽提筒内，连接接收瓶，由索氏提取器的冷凝管上端加入石油醚，石油醚的添加量按每50g异种骨条添加280ml～320ml计；然后于60℃～70℃水浴上加热，使石油醚不断回流抽提，回流抽提过程中至少更换一次接收瓶，并在更换接收瓶时再次注入前述体积量的新的石油醚，直到更换后的石油醚经反复回流抽提脱脂后其颜色仍然保持澄清；停止抽提脱脂，取出异种骨条进行反复冲洗，透析，沥干后得到脱脂后的异种骨材料。

上述的异种骨材料的脱脂处理方法，所述新鲜的异种骨条优选是指宰杀6h内、且去除掉周围软组织、骨膜及骨髓的牛胫骨上端松质骨。

上述的异种骨材料的脱脂处理方法，更换接收瓶的间隔时间优选控制在12h～14h，整个抽提脱脂的处理时间优选控制在48h以上。

上述的异种骨材料的脱脂处理方法，优选的，所述反复冲洗和透析均采用蒸馏水进行，所述反复冲洗和透析的时间控制在24h以上。