[发明专利]一种创制结缕草高频再生系的方法

权利要求书

1.一种创制结缕草再生愈伤组织系的方法，包括如下步骤：将单粒结缕草种子依次经诱导培养、第一次继代培养、第二次继代培养、第三次继代培养，得到结缕草再生愈伤组织系。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述诱导培养、所述第一次继代培养、所述第二次继代培养和所述第三次继代培养采用的培养材料均源自同一个种子；

所述诱导培养为将所述结缕草种子在诱导培养基中诱导培养，得到诱导愈伤组织；

所述第一次继代培养为将所述诱导愈伤组织在第一代继代培养基中第一代继代培养，得到第一次愈伤组织；

所述第二次继代培养为将所述第一次愈伤组织在第二代继代培养基中第二代继代培养，得到第二次愈伤组织；

所述第三次继代培养为将所述第三次愈伤组织在第三代继代培养基中第三代继代培养，得到再生愈伤组织系；

所述诱导培养基为在液体MS培养基中添加具有如下终浓度的各组分：终浓度2mg/L的2,4-D、终浓度的0.15mg/L 6-BA、终浓度30g·L^-1的蔗糖、终浓度7.0g·L^-1的琼脂、终浓度0.5g·L^-1的水解酪蛋白、终浓度1mg·L^-1的VB₁、终浓度1mg·L^-1的VB₂，用水补足体积；

所述第一代继代培养基为在液体MS培养基中添加具有如下终浓度的各组分：终浓度为1mg/L的2,4-D、终浓度为0.2mg/L的6-BA、终浓度为0.2mg/L的ABA、终浓度为40g·L^-1的蔗糖、终浓度为9.0g·L^-1的琼脂、终浓度为0.5g·L^-1的水解酪蛋白、终浓度为1mg·L^-1的VB₁和终浓度为1mg·L^-1的VB₂，用水补足体积；

所述第二代继代培养基为将所述第一次继代培养基中的蔗糖终浓度调整为35g·L^-1、琼脂终浓度调整为8.0g·L^-1，其他成分和浓度不变，用水补足体积；

所述第三代继代培养基为将所述第二次继代培养基中的蔗糖终浓度调整为30g·L^-1、琼脂终浓度调整为7.0g·L^-1，其他成分和浓度不变，用水补足体积。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述诱导培养的条件为温度24-26℃、光照强度1000-3000umol m^-2s^-1下暗培养1个月；

所述第一次、第二次、第三次继代培养条件均为温度24-26℃、黑暗培养20天。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

在所述第一次继代培养后和所述第二次继代培养前还包括如下步骤：选取第一次继代愈伤组织中的胚性愈伤组织。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述结缕草种子为去颖后的结缕草种子。

6.一种制备结缕草再生植株的方法，包括如下步骤：在权利要求1-5任一项中的方法中的第三次继代培养后，将所述结缕草再生愈伤组织系依次经分化培养和生根培养，得到结缕草再生植株；

所述分化培养为将所述结缕草再生愈伤组织系在分化培养基中进行分化培养，得到生芽愈伤组织；

所述分化培养基为在液体MS培养基中添加具有如下终浓度的各组分：终浓度为1.0mg/L 6-BA、终浓度为0.2mg/L KT、终浓度为0.5mg/L ZT、终浓度为30g·L^-1蔗糖、终浓度为7.0g·L^-1琼脂、终浓度为0.5g·L^-1水解酪蛋白，终浓度为1mg·L^-1VB₁、终浓度为1mg·L^-1VB₂，用水补足体积；

在所述分化培养中，所述结缕草再生愈伤组织系的直径大小均具体为0.3-0.5cm。