[发明专利]一种具有解钾作用的变栖克雷伯氏菌及其培养方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物菌种技术领域，尤其是具有解钾作用的变栖克雷伯氏菌，及该变栖克雷伯氏菌的培养方法和应用。 

背景技术

烟草属于喜钾作物，钾含量是判断烟叶品质的重要指标之一，钾在烟草中，除了作为重要的营养元素发挥作用外，还能提高烟叶燃烧性从而降低焦油产生量，提高烟制品的安全性。钾在烟株体内几乎能够参与所有代谢进程(何念祖等，1987)，能够极大地影响烟株的能量和物质代谢。我国目前烟叶钾含量偏低，生产上主要以施用化学钾肥为主，通过增施钾肥，提升钾的有效性，能够有效增加烟叶中钾的含量(马朝文，2006；李强等，2007)。但是，我国的钾肥资源比较匮乏，并且钾肥成本高、利用率低，会破坏土壤的结构，降低有机质的含量(马光庭，2004)，造成污染，提高成本，而且单纯的增施钾肥并不能增加烟叶中钾的含量(郭合营等，1995；宋荣官等，1997)。 

然而在土壤中，含钾量本来是非常丰富的，只是其中95％以上的钾是存在于硅酸盐矿物中，如以云母和钾长石的形态存在(别运清等，2002)，只有不到2％的钾是能够被作物直接吸收利用的速效性钾。 

现有的研究报道，硅酸盐细菌又称为钾细菌，能够分解钾长石、云母等硅酸盐类矿物，即把土壤中的固态钾分解、转化成为可以被作物直接吸收的有效钾，同时它还可以分泌一些促进植物生长的活性物质(葛诚，2000；农业部肥政药政管理办公室，2002)。丁原书(2005)发现对硅酸盐细菌剂能够促进甘薯的生长发育，增强其抗旱性。使用硅酸盐菌剂对玉米拌种，能够提 高出苗率，增加土壤中速效钾含量，促进植株的生长发育(梁盛年等，2006)。 

还有研究表明，作物分泌物对根际微生物种类和数量有较大影响，烟草的许多重要物质如烟碱的合成主要在烟草根际完成，对微生物的影响更为明显。只有适应烟草根际独特的微生态环境，微生物才能定殖及发挥效力。目前有关烟草根际解钾细菌的报道较少，能够适应烟草根际生态环境的高效解钾菌种资源鲜见报道。 

发明内容

本发明针对现有技术中的不足，提出一种具有解钾作用的硅酸盐细菌-变栖克雷伯氏菌，作用于烟草根际生态环境，具有很好的解钾能力。 

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种具有解钾作用的变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola)Trb33菌株，2012年3月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC NO.5933。 

一种如上所述变栖克雷伯氏菌Trb33菌株的培养方法，包括以下步骤： 

(1)从烟草根际取变栖克雷伯氏菌Trb33菌株，接种至现配的斜面培养基活化36～48小时，培养温度为28～30℃； 

(2)取步骤(1)活化后的变栖克雷伯氏菌Trb33菌株，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基，温度为28～30℃，160～200rpm震荡培养24～36小时。 

优选的，所述斜面培养基的组成为：牛肉膏2～4g，蛋白胨4～6g，琼脂18～20g，蒸馏水1L，pH值7.0～7.2。 

优选的，所述牛肉膏蛋白胨液体培养基的组成为：牛肉膏2～4g，蛋白胨4～6g，蒸馏水1L，pH值自然。 

如上所述变栖克雷伯氏菌Trb33菌株在解钾方面的应用。 

优选的，所述应用包括以下步骤： 

①.从烟草根际取变栖克雷伯氏菌的Trb33菌株，接种至现配的斜面培养基活化36～48小时，培养温度为28～30℃；取活化后的变栖克雷伯氏菌Trb33菌株，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基，温度为28～30℃，160～200rpm震荡培养24～36小时； 

②.按每250ml的瓶装入50ml含有钾的硅酸盐矿物的解钾细菌液体培养基，灭菌，冷却后接入1ml步骤①变栖克雷伯氏菌的Trb33菌株培养液，26～30℃、130～170rpm振荡培养6～8d。 

优选的，所述解钾细菌液体培养基组成为： 

优选的，所述应用还包括以下步骤： 

③.将步骤②培养液倒出并定容至50ml，在400～600rpm下离心10～12min，除去发酵液中的不溶性物质；取10ml的菌液8000～15000rpm离心10～15min，取上清液利用原子吸收光谱仪测定水溶性钾含量。