[发明专利]一种基于均相免疫同步荧光检测多个疾病标志物的方法

权利要求书

1.一种基于均相免疫同步荧光检测多个疾病标志物的方法，其步骤如下：

（1）将不同疾病标志物的单克隆抗体分别与不同发射波长的琥珀酰亚胺酯修饰的荧光染料偶联后溶解于溶剂中，配制成偶联物浓度均为1.0×10^-8~1.0×10^-4mol/L的溶液A；

（2）将氧化石墨烯溶解于溶剂配制成1.0×10^-61.0×10^-5mol/L的溶液B；

所述步骤（1）和（2）中的溶剂为水或15mM pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液；

（3）取6μL溶液A与一定量的溶液B混合，然后用水或15mM pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液定容到600μL得溶液C，溶液A和溶液B的比例按偶联物与氧化石墨烯摩尔比1:10~1:20计；

（4）取溶液C 500~1000μL于微量荧光比色皿中，以激发波长280~480nm激发，测量其在发射波长350~700nm处的同步荧光强度；

（5）取6μL溶液A与一定量的溶液B混合，两者的用量关系同步骤（3），加入不同量的待测疾病标志物，用水或15mM pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液定容到600μL后，取样以相同的激发波长激发，测量各自在同一发射波长处的同步荧光强度；

（6）将荧光染料的荧光强度回升值对应于疾病标志物浓度作图，得到定量检测抗原的工作曲线；

（7）在进行实际样品检测时，将处理好的待测溶液进行步骤（5）的操作，以同步荧光强度变化对抗原进行定性识别；或以荧光染料的荧光强度回升值带入工作曲线进行定量分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述荧光染料为琥珀酰亚胺酯修饰的Alexa Fluor或Cy系列荧光染料。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述氧化石墨烯为氧化石墨烯纯净物、氧化石墨烯与石墨烯的混合物或石墨烯的纯净物。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述疾病标志物为流感病毒H1N1、H5N1、H9N2、肝癌标志物甲胎蛋白AFP、癌胚抗原CEA、糖链抗原CA125、糖链抗原CA199、人体肠道病毒EV71、SARS病毒、禽流感病毒、炭疽病毒、艾滋病病毒、出血热病毒、乙肝病毒、柯萨奇B3病毒中的两种以上。