[发明专利]一种促进冬虫夏草菌产分生孢子的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种促进冬虫夏草菌产分生孢子的方法。

背景技术

冬虫夏草菌［Ophiocordyceps sinensis(Berk.)G.H.Sung,J.M.Sung,Hywel-Jones&Spatafora(≡Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.)］是青藏高原特有的名贵药用菌，现代研究表明冬虫夏草具有多种药理作用，具有很好的应用前景。尽管已经对冬虫夏草做了大量研究工作，但迄今在人工栽培方面还存在明显的技术难题。解决这些问题需要更全面地掌握冬虫夏草菌的生物学性状。因此，冬虫夏草菌生物学研究技术的创新，具有重要的理论和实践意义。

在冬虫夏草菌培养研究中，分生孢子的研究与菌剂的制备密切相关。目前，冬虫夏草菌分生孢子研究中的主要困难是分生孢子产量少、周期长，使人工培养获得分生孢子，以及分生孢子悬液的制备一直没有很好地得到解决。如何通过培养获得大量分生孢子，已逐渐成为冬虫夏草菌生物学研究的瓶颈。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种促进冬虫夏草菌产生分生孢子的方法。

本发明所提供的促进冬虫夏草菌产生分生孢子的方法，包括将冬虫夏草菌在营养刺激和环境刺激的条件下进行培养的步骤；所述步骤包括：

1）将冬虫夏草菌在富营养固体培养基上在黑暗条件下培养，得到菌丝体；

2）将所述步骤1）的菌丝体转移到次营养固体培养基上进行下述至少一种刺激培养，得到分生孢子：冷激培养、热激培养、温度周期刺激培养、光周期刺激培养、温度光周期刺激培养和氧化刺激培养；所述富营养固体培养基的氮源含量高于所述次营养固体培养基，所述冬虫夏草菌在富营养固体培养基中的菌落生长速率大于所述冬虫夏草菌在次营养固体培养基中的菌落生长速率；

所述冷激培养是将所述菌丝体先置于所述菌丝体能够存活但不利于生长的低温中黑暗培养再置于适宜所述菌丝体生长的温度中黑暗培养至产生分生孢子；

所述热激培养是将所述菌丝体先置于所述菌丝体能够存活但不利于生长的高温中黑暗培养再置于所述适宜所述菌丝体生长的温度中黑暗培养至产生分生孢子；

所述温度周期刺激培养是将所述菌丝体置于所述适宜所述菌丝体生长的温度和所述高温交替的环境中黑暗培养至产生分生孢子，或将所述菌丝体置于所述适宜所述菌丝体生长的温度和所述低温交替的环境中黑暗培养至产生分生孢子；

所述光周期刺激培养是将所述菌丝体置于所述适宜所述菌丝体生长的温度在每天既有光照又有黑暗的条件下培养至产生分生孢子；

所述温度光周期刺激培养是将所述菌丝体置于所述适宜所述菌丝体生长的温度和所述高温交替的环境中在每天既有光照又有黑暗的条件下培养至产生分生孢子，或将所述菌丝体置于所述适宜所述菌丝体生长的温度和低温交替的环境中在每天既有光照又有黑暗的条件下培养至产生分生孢子；

所述氧化刺激培养是将所述菌丝体先置于具有氧化胁迫的环境中培养再置于所述适宜所述菌丝体生长的温度中黑暗培养至产生分生孢子。

本发明中，所述营养刺激是指将菌丝体在所述富营养固体培养基进行菌丝体培养，在所述次营养固体培养基中进行产孢培养。

所述冬虫夏草菌的适宜生长温度可为10–23℃，如15–18℃；

所述低温是低于所述菌丝体生长的适宜温度且所述菌丝体能够存活但不利于生长的温度，如–40–4℃；所述高温是高于所述菌丝体生长的适宜温度且所述菌丝体能够存活但不利于生长的温度，如24–30℃。所述低温具体可为–20-4℃，所述高温具体可为28–30℃。

上述方法中，所述冷激培养可为将所述菌丝体先置于所述低温中黑暗培养1天再置于所述适宜所述菌丝体生长的温度中黑暗培养至产生分生孢子；

所述热激培养可为将所述菌丝体先置于所述高温中黑暗培养1小时再置于适宜所述菌丝体生长的温度中黑暗培养至产生分生孢子；

所述温度周期刺激培养中，所述适宜所述菌丝体生长的温度和所述高温交替是第奇数天的温度为所述适宜所述菌丝体生长的温度，第偶数天的温度为所述高温；或是第偶数天的温度为所述适宜所述菌丝体生长的温度，第奇数天的温度为所述高温；

所述温度周期刺激培养中，所述适宜所述菌丝体生长的温度和所述低温交替是第奇数天的温度为所述适宜所述菌丝体生长的温度，第偶数天的温度为所述低温；或是第偶数天的温度为所述适宜所述菌丝体生长的温度，第奇数天的温度为所述低温；