[发明专利]黄曲霉毒素G1胶体金免疫层析检测板制备及检测方法

权利要求书

1.黄曲霉毒素G1 胶体金免疫层析检测板，其特征在于：外壳内包括一条试纸条，试纸条的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接；金标垫：用胶体金和黄曲霉毒素G1抗体结合制成金标抗体；结合过程：将50 mL浓度为1 x 10^-4 g/mL的氯金酸溶液加热到沸腾，然后迅速加入1.5 mL柠檬酸三钠，继续加热搅拌反应15 min得到胶体金溶液，然后将抗体溶液以1：1体积比的比例逐滴加入到胶体金溶液中，边加边搅拌，反应5 min后，即得到金标抗体溶液，将制备好的金标抗体调成 A₅₄₀=1.0 的浓度，均匀分散在玻璃纤维滤膜上，自然干燥后即为金标垫备用；所用检测板为：用划膜仪对硝酸纤维素膜进行检测试剂线性包被，下端横线包被黄曲霉毒素G1抗原AFG1-BSA，浓度为0.5 mg/mL为检测线，上端横线包被羊抗鼠IgG，浓度为1 mg/mL为控制线，包被检测线和质控线后的硝酸纤维素膜自然干燥后用 0.1 mol/L的BSA的pH 7.4的PBS溶液浸泡30 min进行封闭处理，干燥后备用；将样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫四部分依次相互叠加粘贴于试剂板上，以一定宽度切条后即为黄曲霉毒素G1半定量速测检测板。

2.根据权利要求1 所述的黄曲霉毒素G1免疫层析检测板的制备方法，其特征在于：包括以下步骤： 

(1) 吸水垫的制备

将吸水纸剪裁即得吸水垫；

(2) 检测垫的制备

检测线（T线）的包被： 

将黄曲霉毒素G1-牛血清白蛋白的偶联物配制成0.5 mg/mL的溶液A；于距离硝酸纤维素膜上沿为 10-15 mm 的位置，用自动划膜仪将溶液A 横向包被于硝酸纤维素膜上得到检测线，检测线上所需黄曲霉毒素G1- 牛血清白蛋白的偶联物(AFG1-BSA) 的包被量为215 ng/cm，然后于37～40℃条件下干燥5～20 min；

质控线（C线）的包被： 

将兔抗鼠多克隆抗体配制成1 mg/mL 的溶液B；于距检测线5～10 mm的位置，用自动划膜仪将溶液B横向包被于硝酸纤维素膜上，得到质控线；质控线上所需兔抗鼠多克隆抗体的包被量为300 ng/cm，然后于37～40℃条件下干燥5～20 min；

(3) 金标垫的制备

用胶体金和黄曲霉毒素G1抗体结合制成金标抗体，结合过程为：将50 mL浓度为1 x 10^-4 g/mL的氯金酸溶液加热到沸腾，然后迅速加入l.5 mL柠檬酸三钠，继续加热搅拌反应15 min得到胶体金溶液，然后将抗体溶液以1：1体积比的比例逐滴加入到胶体金溶液中，边加边搅拌，反应5 min后，即得到金标抗体溶液，将制备好的金标抗体调成A₅₄₀ =1.0的浓度，分散在玻璃纤维滤膜上，自然干燥后即为金标垫备用；

(4) 检测板的组装

选用与上述试纸条相匹配的检测卡外壳，将试纸条置入卡壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗口。

3.如权利要求1所述方法制备的黄曲霉毒素G1半定量速测检测板的应用方法，其特征是：

直接提取法（可测30 μg/kg的饲料）

(1)将饲料、谷物、麦芽样品进行粉碎以使75%的样品可以通过20目筛，样品的大小颗粒与速溶咖啡相当；

(2)称取3.0 g粉碎好的样品，加入9 mL样品提取液（提取液配制：50 mL甲醇+50 mL水，加4 g氯化钠混匀即得样品提取液，可按需配置），充分搅拌混合（10 min）；

(3)静置20 min后轻轻吸取上清液，按1：1比例与样本稀释液混合均匀后进行样品检测；

烘干/吹干处理法（可测20 μg/kg的饲料）

(1) 将饲料、谷物、麦芽样品进行粉碎以使75%的样品可以通过20目筛，样品的大小颗粒与速溶咖啡相当；

 (2) 称取3.0 g粉碎好的样品，加入9 mL样品提取液（提取液配制：先用20 mL水将加4 g氯化钠溶解，再加入80 mL甲醇，即得样品提取液，可按需配置），充分搅拌混合（3 min），静置20 min；

 (3) 轻轻吸取上清液1 mL，放于110℃烘箱中烘干（约1 h）或50～60℃水浴氮气吹干，用0.5 mL 10% 甲醇充分溶解后即可进行样品检测。