[发明专利]弗霉素B及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种生物活性物质弗霉素B，所述的弗霉素B由海洋弗氏链霉菌Streptomyces fradiaePTZ0025产生，具有以下化学结构式：

。

2.根据权利要求1所述的一种生物活性物质弗霉素B的制备方法，通过以下步骤实现：

（1）弗霉素B产生菌Streptomyces fradiae PTZ0025的培养分离

取空气干燥的海洋沉积物用液体菌种培养液稀释，稀释后的浓度为0.1~0.0001 g/ml,取稀释液均匀分散到含有固体培养基的培养皿中，在常温的20~30°C条件下培养7~15天,将不同的菌落分别转移到另一含有固体培养基的培养皿中，在常温的20~30°C条件下继续培养，最后将生长良好的单一菌落转移到斜面培养基并置于4°C冰箱保存备用； 

所述的液体菌种培养液每100ml的组成为：5.0克葡萄糖、1.5克丙三醇、1.5克麦芽提取物、2.5克酵母提取物、0.5克酪蛋白氨基酸和0.1克碳酸钙，或是适宜菌株PTZ0025生长的其它组成的液体培养基；

（2）弗霉素B产生菌Streptomyces fradiae PTZ0025的菌种鉴定

步骤（1）所获得的菌株用目前实验室普遍使用的16S rDNA序列分析方法鉴定种类，确定为菌株弗氏链霉菌，分类命名为Streptomyces fradiae PTZ0025，已被武汉中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号CCTCC NO：M 2012374；

（3）弗霉素B产生菌Streptomyces fradiae PTZ0025发酵菌液的制备

取步骤（1）的单一菌落与灭菌水在微量离心管混合后匀浆，将细菌匀浆液转移到含有液体菌种培养液的小锥形瓶中，旋转振摇培养7~15天，培养温度为25~28°C，再转入含有液体培养基的大三角培养瓶，在常温条件下25~28°C旋转振摇发酵培养7~15天，得到具有抗菌活性的PTZ0025发酵菌液；

其中大三角培养瓶所用的液体培养基每500 ml的配方为：3.0 g葡萄糖，2.5 g丙三醇，7.5 g 可溶性淀粉，2.0 g 豆粉, 1.5 g 鱼粉，1.5 g氯化钙和50 ml灭菌海水，或是适宜菌株PTZ0025生长的其它配方的液体培养基；

（4）弗霉素B的提取分离纯化和结构鉴定

PTZ0025的发酵菌液经高速离心，弃去上清液后的残留物用有机溶剂提取，提取液经减压浓缩得到的提取物用Diaion HP-20大孔吸附树脂和十八烷基硅烷键合硅胶柱层析相结合的方法分离得到含有弗霉素B的活性组分，活性组分用高效液相分离纯化得到活性单体化合物弗霉素B。

3.根据权利要求2所述的一种生物活性物质弗霉素B的制备方法，其特征在于，步骤（1）样品稀释液的取样量为50~300 ml，培养皿所含的固体培养基为细菌琼脂培养基或其它固体培养基，斜面培养基为高氏合成斜面培养基或其它固体斜面培养基。

4.根据权利要求2所述的一种生物活性物质弗霉素B的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述的灭菌水为海水、蒸馏水或实验室其它用水，使用量为100~500 ml，液体菌种培养液同步骤(1)所述，使用量为20~50 ml。

5.根据权利要求2所述的一种生物活性物质弗霉素B的制备方法，其特征在于，步骤（4）所述的有机溶剂为乙醇、甲醇或丙酮；所述柱层析的大孔吸附树脂用量与上量的提取物比例是10~20 ml：1.0 g，十八烷基硅烷键合硅胶用量与上量的样品量比例是40~60 g：1.0 g；所述的高效液相条件是: Agilent 1100高效液相色谱仪，Cosmosil C₁₈ 色谱柱 250 ′ 10.0 mm，5 mm，乙腈/水为流动相，检测波长295 nm，流速为3.0 ml/min。

6.根据权利要求1所述的一种生物活性物质弗霉素B在制备治疗金黄色葡萄球菌所引起的感染性疾病药物中的应用。

7.根据权利要求1所述的一种生物活性物质弗霉素B在制备治疗恶性肿瘤药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的恶性肿瘤为消化系统肿瘤和脑肿瘤，涉及肠癌和脑胶质瘤。