[发明专利]一种检测呋喃丹的快速检测试剂板的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及检测稻、棉、玉米、高粱、甜菜、甘蔗、烟草、大豆、花生等作物以及林木、花卉上是否含有呋喃丹的残留。

背景技术

呋喃丹是氨基甲酸酯类杀虫剂和杀线虫剂。1963年由美国创制，1967年推广。纯品为白色结晶，25℃时水中溶解度为700 ppm，在中性和酸性条件下较稳定，在碱性介质中不稳定，水解速度随pH值和温度的升高而加快。在水田中半衰期为1～2天，土壤中为30～60天。呋喃丹是内吸剂，兼有触杀作用，能被植物根、茎、叶吸收，并在体内传导。多施于土壤防治害虫。杀虫谱广，对稻、棉、玉米、高粱、甜菜、甘蔗、烟草、大豆、花生等作物以及林木、花卉上的多种害虫和线虫有效，但对稻纵卷叶螟效果差。持效期长，一般可达30～40天。剂型主要是颗粒剂。防治地上害虫亩用有效成分35～60克；防治地下害虫和线虫亩用200～250 g。稻田多用土壤或水面施药法；防治旱田作物害虫和地下害虫、线虫时随种子播入土中；作物生长期可条施或沟施入土中。颗粒剂不能浸水后喷雾。呋喃丹口服毒性大，皮肤接触毒性小，对人的中毒作用在于它抑制胆碱酯酶，硫酸阿托品可作为解毒剂。使用时的安全间隔期一般为21天。对鱼和其他水生动物有剧毒。 

呋喃丹主要抑制体内胆碱酯酶活性，使乙酰胆碱在组织中蓄积而引起中毒。作用机制和有机磷农药中毒相似。中毒表现有流涎、流泪、瞳孔缩小及痉挛。但与有机磷农药相比，抑制胆碱酯酶的作用持续的时间较短。停止接触后，胆碱酯恢复较快。其毒性经口属剧毒类；经皮属中等毒类。呋喃丹属高毒农药，对环境生物毒性也很高。在各种环境生物中，呋喃丹对鸟类的危害性最大，一只小鸟只要觅食一粒呋喃丹足以致命。受呋喃中毒致死的小鸟或其它昆虫，被猛禽类、小型兽类或爬行类动物觅食后，可引起二次中毒而致死。在美国曾发现30余起猛禽（鹰、隼、秃鹫）遭呋喃丹二次中毒事故。呋喃丹的另一个环境行为特点是它在土壤中的残留期较长（降解半衰期为1～2个月）、在土壤中的移动性能较大（水溶解度为700 mg/L），在降水量大、地下水位浅的砂土地区易引起对地下水的污染，为此美国对呋喃丹使用作了一些区易引起对地下水的污染，为此美国对呋喃丹使用作了一些地区性限制。呋喃丹遇明火、高热可燃。受热分解放出有毒的氧化氮烟气。其燃烧（分解）产物有一氧化碳、二氧化碳、氧化氮。 

发明内容

本发明是一项针对粮食农作物及林木中的呋喃丹残留所开展研究，目的是为了克服现有技术的不足，提供一种特异性强，灵敏度高，且操作简单方便，适用于现场快速筛选呋喃丹阳性样本，只需对样品经过简单处理即可检测的呋喃丹快速试纸定量检测方法。

本发明所制作的免疫胶体金检测试剂板主要由上下两块塑料卡壳，试纸条组成。试纸条包含样品垫、金标垫、NC膜、吸水纸。NC膜上划有检测线（T线），质控线（C线）。试剂条上依次紧密粘贴着样品垫、金标垫，NC膜和吸水纸。其中样品垫、金标垫、NC膜和吸水纸相邻之间有2 mm的重叠。其作用有两方面：第一是为了使样品溶液和样品垫之间有充分的反应时间，样品垫上的缓冲体系可以中和样品溶液的酸碱度，保证样品溶液中的有效成分与金标垫上的抗体顺利结合；另一方面是为了让样品溶液顺利通过NC膜的孔，一直延展到吸水纸；金标垫上包被有呋喃丹抗体与胶体金的结合物，检测线和质控线上分别划有呋喃丹载体蛋白偶联物和羊抗兔抗抗体。

本发明所制备的快速检测试剂板应用层析式抗体免疫竞争原理，通过抗原和金标垫上的抗体反应显色，快速的检测粮食中的呋喃丹残留。若是样品溶液中含有呋喃丹，呋喃丹先和金标垫上的抗体先结合，直至扩散到检测线。因为金标垫上的抗体活性位点因被样品溶液中的呋喃丹载体蛋白偶联物占据而无法与检测线上呋喃丹特异性抗原结合。当样品中的呋喃丹含量超过试剂板检出限时，试剂板上的检测线显色比质控线显色浅甚至不显色，此时结果为阳性。反之，当样品中呋喃丹含量在试剂板检出限以下或无残留时，试剂板上的检测线显色与控制线相近或偏深，判定为阴性。

本发明制备的免疫胶体金快速检测试剂板，试剂板的各部分组成成分与功能如下：

1、塑料卡壳：起固定试纸条及标示功能区，显示加样孔，标示检测线、质控线；

2、试纸条为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸和其他配件；

3、样品垫由玻璃纤维制成，起吸收样品溶液与缓冲样品溶液的作用；

4、金标垫由玻纤制成，其上标记有抗呋喃丹抗体与胶体金的结合物，是样品溶液中的有效成分与金标抗体发生反应的场所；

5、NC膜部分主要作用是将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来；