[发明专利]鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗、制备方法及其应用

权利要求书

1.鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗，其特征在于：它含有鸭大肠杆菌菌株ECHB-3 (Escherichia coli ECHB-3)、鸭大肠杆菌菌株ECHB-9(Escherichia coli ECHB-9)、鸭大肠杆菌菌株ECHB-40 (Escherichia coli ECHB-40)的灭活菌液，所述灭活菌液中的活菌总数为30~60亿cfu/mL；其中：所述的鸭大肠杆菌菌株ECHB-3(Escherichia coli ECHB-3)已保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏号为CCTCC NO：M2011438，分类命名为大肠杆菌ECHB-3(Escherichia coli ECHB-3)；所述的鸭大肠杆菌菌株ECHB-9(Escherichia coli ECHB-9)已保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏号为CCTCC NO：M2011439，分类命名为大肠杆菌ECHB-9(Escherichia coli ECHB-9)；所述的鸭大肠杆菌菌株ECHB-40(Escherichia coli ECHB-40)已保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏号为CCTCC NO：M2011440，分类命名为大肠杆菌ECHB-40(Escherichia coli ECHB-40)。

2.根据权利要求1所述的鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗，其特征在于：所述灭活菌液中鸭大肠杆菌ECHB-3的个数为10~20亿cfu/mL，鸭大肠杆菌ECHB-9的个数为10~20亿cfu/mL，鸭大肠杆菌ECHB-40的个数为10~20亿cfu/mL。

3.根据权利要求1所述的鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗，其特征在于：所述的鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗还包括佐剂和防腐剂。

4.根据权利要求3所述的鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗，其特征在于：所述的佐剂为氢氧化铝胶生理盐水，按体积比计，所述的佐剂量以每5份制苗用混合菌液加入1份进行计量；所述的防腐剂为硫柳汞，所述的防腐剂以加入佐剂后的体系总量的0.005wt%进行计量。

5.鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

（1）疫苗种子液的制备

一级种子繁殖: 各菌株冻干菌种分别接种于马丁肉汤中，36~37℃培养24小时，然后划线接种于麦康凯琼脂平板上培养，选取符合标准的典型菌落10个，混合于少量马丁肉汤中，接种马丁琼脂斜面若干支，置36~37℃培养20~24小时，作为一级种子；

二级种子繁殖：取一级种子接种于马丁肉汤中，36~37℃培养20~24小时，进行纯粹检验，纯粹，获得二级种子液；

（2）制苗用混合菌液的制备

将大肠杆菌菌株ECHB-3、大肠杆菌菌株ECHB-9、大肠杆菌菌株ECHB-40分别培养得到的二级种子液以体积比为1：1：1混合，按培养基量的2%~4%(v/v) 接种于马丁肉汤中，36~37℃培养20~24小时，得到混合菌液；

（3）灭活菌液制备

灭活，得灭活菌液，所述灭活菌液中的活菌总数为30~60亿cfu/mL，后经灭活检验合格后即得。

6.根据权利要求5所述的鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗的制备方法，其特征在于：它还包括后续步骤：按体积计，以每5份制苗用混合菌液加入1份氢氧化铝胶生理盐水佐剂，然后按加入佐剂后体系总量的0.005wt%加防腐剂硫柳汞，充分振荡，于2~8℃静置2~3日，抽弃上清浓缩成全量的60%(v/v)；然后经无菌检验合格后进行混合分装，分装时随时搅拌使其混合均匀。

7.根据权利要求5所述的鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中的一级种子液置于2~8℃保存，使用期不超过21日；所述的二级种子液置于2~8℃保存，使用期不超过3日。

8.根据权利要求5所述的鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）的灭活为按体积比为0.4%加入甲醛溶液，经38℃灭活48~72小时，期间每隔4~6小时振摇一次。