[发明专利]一种生物碱类化合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物碱类化合物，尤其是涉及一种生物碱类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

吲哚生物碱类化合物是生物碱类化合物的最大的家族，可治疗呼吸、消化、心血管、中枢神经和肿瘤等广泛疾病。目前主要从植物中提取获得，很少从细菌中发现。本发明人研究得知，海洋细菌Pseudoalteromonas rubra.QD1-2（保藏于国家海洋局第三海洋研究所，保藏编号为：CGMCC No.1k00044）液体发酵产物经乙酸乙酯提取，提取物有很好的细胞增殖抑制活性，于是对其活性成分进行了研究。目前尚未见该化合物的化学结构及细胞增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种具有抑制肿瘤细胞增殖，具有抗肿瘤活性的生物碱类化合物及其制备方法和用途。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种生物碱类化合物，该生物碱类化合物的结构式如下所示，

一种生物碱类化合物的制备方法，具体包括如下步骤：

（1）发酵生产

将假交替单胞菌（Pseudoal terommonaas rubra.QD1-2）保藏号为CGMCCNo.6555划线接种到Zobell2216E固体斜面培养基上，于30℃培养箱中培养1天后；将斜面培养获得的菌落接种1个菌落到400ml EM培养基中，于30℃，转速150rpm的条件下摇床培养7天，获得发酵产物；

（2）浸膏的获得

将发酵产物用离心机离心去除菌体，获得发酵液，取发酵液加入等体积的乙酸乙酯充分萃取1次，收集萃取液，再取萃余液加入等体积的乙酸乙酯重复萃取1次，收集萃取液，再将获得的萃余液加入等体积的乙酸乙酯重复萃取1次，合并三次萃取所得萃取液，用旋转蒸发仪将乙酸乙酯去除，获得粗浸膏；

（3）化合物的分离精制

将粗浸膏用甲醇溶解后，用半制备反相高效液相色谱进行分离纯化得到生物碱类化合物，其结构如下所示：

所述的Zobell2216E培养基的配制方法如下：蛋白胨5.0g,酵母膏1.0g,磷酸铁0.01g,琼脂16.0g，陈海水1000ml，调pH至7.6-7.8。

所述的EM培养基的配制方法如下：蛋白胨1g，酵母粉2g，葡萄糖0.1g，天然海水1000ml。

所述的半制备反相高效液相色谱的洗脱液为甲醇与水按体积55:45的比例混合而成。

一种生物碱类化合物的应用，所述的生物碱类化合物具有抑制肿瘤作用。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明一种生物碱类化合物及其制备方法和用途，通过微生物发酵培养来获取吲哚生物碱类化合物的发酵物，然后将发酵产物用乙酸乙酯提取，得粗浸膏，将该提取物经反相半制备高效液相色谱分离纯化得到，该生物碱类化合物具有抑制细胞活性，抗肿瘤作用。

上述假交替单胞菌（Pseudoalteromonaas rubra.QD1-2），该菌为QD1-2菌株，保藏编号为CGMCC No.6555，于2012年09月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1

一种生物碱类化合物结构式如Ⅰ所示。

实施例2

如I式所示的生物碱类化合物的制备方法，具体包括如下步骤：

（1）发酵生产

将假交替单胞菌（Pseudoalteromonas rubra.QD1-2）保藏号为CGMCCNo.6555划线接种到Zobell2216E固体斜面培养基上，于30℃培养箱中培养1天后；将斜面培养获得的菌落接种1个菌落到400ml EM培养基中，于30℃，转速150rpm的条件下摇床培养7天，获得发酵产物；

（2）浸膏的获得

将发酵产物用离心机离心去除菌体，获得发酵液，取发酵液加入等体积的乙酸乙酯充分萃取1次，收集萃取液，再取萃余液加入等体积的乙酸乙酯重复萃取1次，收集萃取液，再将获得的萃余液加入等体积的乙酸乙酯重复萃取1次，合并三次萃取所得萃取液，用旋转蒸发仪将乙酸乙酯去除，获得粗浸膏；

（3）化合物的分离精制

将粗浸膏用甲醇溶解后，用半制备反相高效液相色谱进行分离纯化得到生物碱类化合物，其结构如下所示：