[发明专利]预防和治疗水禽H9亚型禽流感的疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种预防水禽H9亚型禽流感病毒感染的疫苗及其制备方法，属于兽医疫苗领域。

背景技术

禽流感(AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起禽类及其他鸟类的一种感染和/或疾病综合征，其中的H9亚型禽流感病毒从1994年在我国首次被分离鉴定以来，已在我国多数养禽地区有流行，并且常与其他病原体并发和继发感染，给我国的养禽业造成了巨大的经济损失。该病毒主要侵害陆生禽类，在水禽通常造成无症状感染，并在偶然情况下可以传播给人，引起轻微症状。然而，最近几年，H9亚型禽流感感染水禽并导致发病的报道逐渐增多，并且水禽作为禽流感病毒的储存宿主，在感染禽流感病毒以后，允许禽流感病毒在体内存在较长时间并复制，进而将病毒传播给临近的陆生禽类(包括鸡、鹌鹑等)和哺乳动物(如猪、人等)，引起其发病。因此控制水禽H9亚型禽流感病毒的感染具有重要意义。

目前，对于家禽H9亚型禽流感感染的预防主要是使用H9亚型禽流感病毒制备的全病毒油乳剂灭活疫苗，但是已经商品化的疫苗所用的疫苗株全部是从鸡中分离得到，但这些疫苗用于水禽后，存在着抗体产生速度慢、抗体效价不高等缺点。如CN101843900A中公开的H9亚型禽流感灭活疫苗，可以用于预防鸡H9亚型禽流感病毒的感染，但不能用于鸭H9亚型禽流感感染的预防。因此寻找到一株对水禽具有较高的适应性、能够诱导水禽产生高效价抗体的疫苗株就成为了预防水禽H9亚型禽流感病毒感染的关键。而且H9亚型禽流感病毒的主要抗原基因——HA基因变异非常快，导致已有的疫苗株与当前的流行株的抗原性产生了较大的差异。因此，一直以来也没有筛选获得合适的病毒株作为疫苗株制备预防水禽禽流感的疫苗。

发明内容

发明人从发病鸭场中获得的H9亚型禽流感病毒，所述H9亚型禽流感病毒具有特别高的免疫原性，使用所述H9亚型禽流感病毒作为抗原制备的油乳剂灭活疫苗，不仅具有良好的免疫原性，还具有抗体滴度高，且产生速度快的特点，可有效用于水禽(如鸭、鹅)H9亚型禽流感感染的预防。

本发明提供了一种H9亚型禽流感病毒，所述病毒HA基因编码的氨基酸序列包含如图1所示的具有131-K、224-M、253-I和377-E4个氨基酸取代位点。

优选地，所述H9亚型禽流感病毒还包含127-S、129-Y、147-T、152-S、188-W和216-D6个保守的氨基酸位点。

优选地，本发明提供了一种H9亚型禽流感病毒(Avian Influenzavirus)D1株，分类命名为禽流感病毒H9亚型D1株，拉丁文学名为Aviarius Influenza，保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2012年6月14日，保藏号为CCTCC NO：V201226；本发明还提供了一种H9亚型禽流感病毒YZG4株，分类命名为禽流感病毒H9亚型YZG4株，拉丁文学名为Aviarius Influenza，保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2012年6月14日，保藏号为CCTCC NO：V201227。

本发明提供了一种DNA序列，所述序列实质上编码含有SEQ.NO.2的氨基酸序列；所述SEQ.NO.2为禽流感毒D1株HA蛋白11-570位的氨基酸序列。

本发明提供了一种DNA序列，所述序列实质上含有SEQ.NO.1的核酸序列；所述SEQ.NO.1为禽流感毒D1株HA基因34-1713位的核酸序列。

本发明中的术语“实质上含有”是指本发明的基因或多肽在保持其功能的范围内，序列号1的核酸序列，序列号2的氨基酸序列可以发生置换、插入或缺失等变异。

本发明提供了一种HA抗原蛋白，所述HA抗原蛋白包含如图1所示的具有131-K、224-M、253-I和377-E4个氨基酸取代抗原位点和127-S、129-Y、147-T、152-S、188-W和216-D6个保守的氨基酸抗原位点的H9亚型禽流感病毒HA共有序列。

因此，本发明的第二方面在于提供一种用于预防和治疗H9亚型禽流感的疫苗，所述疫苗包括病毒HA基因编码的氨基酸序列包含如图1所示的具有131-K、224-M、253-I和377-E4个氨基酸取代位点和127-S、129-Y、147-T、152-S、188-W和216-D6个保守的氨基酸位点的全病毒抗原和佐剂。