[发明专利]抗A、抗B血型定型试剂

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及利用杂交瘤技术生产杂交瘤细胞及由其制备的单克隆抗体和血型定型试剂。

背景技术

自Landsteinor(1900)发现ABO血型以来，血型鉴定试剂主要用人血清，存在着个体间差异较大、质量不稳定、成本高、需耗用大量人血等问题。多年来各国学者一直致力寻找一种理想的试剂代替人血清，先后用鱼类、蜗牛、扁豆等动植物组织浆液进行研究，但由于种种问题未能普及推广应用。Voak(1980)和Sacks(1981)用淋巴细胞杂交技术先后建立了分泌抗A型、抗B型单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并将其用于ABO系统血型鉴定。迄今已有几株具有良好特性的抗A、抗B是可用的，其中1983年英国剑桥医学研究所分子生物学实验室研制的ABO血型系统McAb已达到美国食品和药品管理局(FDA)的技术标准，获准由英国特别生物技术公司(Celltech)大批生产并销往西欧、美洲和日本市场；1987年法国(CNTS)和日本出售同类产品。据美国波士顿生物医学咨询公司调查，血液制品的McAb以92％的年增长率递增，1990年达到1亿3千万美元。如今，在世界各国，ABO血型单克隆抗体试剂已成为常规试剂，在我国抗A、抗B单克隆抗体血型试剂占所有临床应用的ABO血型试剂总量90％以上。我国是一个13亿人口的大国，对血型定型试剂需求量非常大，而目前市场上供应的血型定型试剂在质量和数量上不能满足市场的需求。

目前市场上抗A抗B试剂生产用细胞株由于细胞培养分泌上清抗体盐水凝集效价不够国家标准，为达到国家标准，在试剂中添加少量腹水，这样会大大增加成本，而且由于腹水中杂抗体会对试剂结果产生干扰。由此，开发安全可靠、性价比高的抗A、抗B单克隆抗体血型试剂具有较大的社会效益和经济效益。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种交杂瘤细胞，其保藏编号分别为：CCTCCC201215和CCTCC C201216；分别由人A血型红细胞、人B血型红细胞免疫小鼠后制备获得。

本发明的另一个目的是提供上述杂交瘤细胞生产的单克隆抗体，所述单克隆抗体分别为A血型的单克隆抗体和B血型的单克隆抗体。

本发明的又一个目的是提供了包含所述A血型的单克隆抗体和B血型的单克隆抗体的血型定型试剂；进一步提供了包含所述试剂的试剂盒及其使用方法。

本发明的抗A和抗B单抗细胞株由于分泌上清的抗体盐水凝集效价很高，达到甚至超过国家标准，且经实验证明所述抗A抗B单克隆抗体可完全满足临床血型筛查的需求，具有特异性强、稳定性好、生产成本低等优点，各项指标达到国内外同类产品的水平。

生物材料的保藏信息：

分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株分别命名为9H5和8G9，于2012年9月18日提交到中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏号为：CCTCC C201215和CCTCC C201216。

具体实施方式

以下实施例有助于进一步了解本发明的优点和特点，不应视为对本发明的限制。所使用的实验材料如无特别说明均为普通市售。

【实施例1】抗A抗B血型单克隆抗体的制备

1.免疫方法和程序：

免疫原：分别采用人A血型红细胞、人B血型红细胞。

免疫动物(湖北省实验动物中心提供)：BALB/C小鼠，雌性，6-8周龄。

方法：A型或B型红细胞分别用生理盐水洗涤两次并调制成1亿/每毫升浓度；对免疫动物进行多点注射，每隔一周注射一次，第四针加强后三天取脾脏细胞用于细胞融合。

2.单抗制备

2.1细胞融合

融合用骨髓瘤细胞：用小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0(P2-X-Ag8·6·5·3)(购自中国科学院武汉病毒研究所病毒保藏中心)，为Ig非分泌型。

融合方法：

(1)制备饲养细胞：采用BALB/C小鼠腹腔巨噬细胞，作为融合时的饲养细胞；取BALB/C小鼠一只，拉颈处死，75％乙醇浸泡5分钟，在无菌操作下，用不含小牛血清RPMI1640培养基注入腹腔冲洗，并吸出冲洗液，如此反复4次，洗液用不含小牛血清的RPMI1640培养基洗涤2次，计数，用含20％小牛血清的RPMI1640培养基配制成1.0×106个/ml的细胞悬液；于96孔板中按50微升/孔滴加。