[发明专利]一种文昌鱼类凝集素及其表达基因与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种文昌鱼类凝集素及其表达基因与应用，特别是一种海洋模式生物文昌鱼类凝集素AmphiITLN239631及其表达基因与应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

凝集素是一类能专一识别细菌表面多糖的蛋白，能通过凝集、包埋、调理吞噬等方式参与宿主中由病原菌引起的免疫防御反应。类凝集素（Intelectin）是一类新发现的凝集素，与传统的凝集素相比，类凝集素在结构上虽然并不具有传统的carbohydrate recognition domain(CRD)结构域,但在N末端具备fibrinogen βchain and γchain（FReD）的结构域，在C端有Intelectin结构域。最早被发现的成员是非洲爪蟾的XL35。单糖特异结合实验表明XL35在Ca²⁺存在的情况下特异性地结合D-呋喃半乳糖。小鼠有两个同源基因（intelectin 1/2），Northern blotting分析显示小鼠的intelectin1特异地表达在整个肠道，原位杂交结果显示其mRNA定位于小肠的潘氏细胞(paneth cell)。因此推测小鼠的intelectin1可能参与肠道的黏膜屏障，起着抵御微生物入侵或调节粘液物质等作用。而小鼠intelectin 2是诱导性表达，在正常情况下表达在回肠部位，但是感染后会扩展到空肠、回肠、盲肠、结肠。

迄今为止，在人中发现了两个intelectin的同源基因,HL-1和HL-2(Lee et al.,2001)。HL-1主要表达于心脏、小肠、胸腺，同时在卵巢、精巢、脾脏中也有少量表达，而HL-2则特异表达于小肠。HL-1能特异地识别一些重要的病原菌如分支杆菌(Mycobacterium)和诺卡氏菌(Nocardia)表面的呋喃半乳糖，因此推测HL-1可能参与机体对含呋喃半乳糖细菌的免疫反应。鲶鱼中也发现了两个intelectin同源基因，二者的表达模式差异很大：intelectin 1表达于鳃、肠道、头肾、肝脏、表皮、脾脏、胃和肌肉中，而intelectin 2主要表达于肝脏，在肠道和肾中表达量较低。两个基因在大肠杆菌的刺激下表达量都会上调，这也暗示了intelectins参与鲶鱼的免疫防御。此外，草鱼中也发现了intelectin同源基因，其中intelectin2分布于除肝脏之外的所有组织。另外，在海鞘(Halocynthia roretzi)，虹鳟(Oncorhynchus mykiss)和七鳃鳗(Lethenteron japonicum)中也都发现了XL35的同源基因。研究证明intelectin基因家族在很多物种中广泛存在，而其序列上的保守性又暗示了它们在动物体内行使着某些很重要的功能。

我国拥有漫长的海岸线，海水养殖业的发展对于国民经济的可持续发展具有重要意义。然而，多年来病害严重地妨碍着海水养殖业的迅速发展。由于文昌鱼既具有脊椎动物的基本特征，又具有许多无脊椎动物的特征。研究文昌鱼的免疫防御机制和对病原感染应答的规律，能够为阐明海水养殖动物免疫防御机制提供资料，为开发海水养殖控制病害提供新方法、新思路，也为养殖水产动物病害的免疫防治技术提供理论依据。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种海洋模式生物文昌鱼类凝集素AmphiITLN239631及其表达基因与应用。

术语说明

1.PCR技术：链式聚合酶反应，利用DNA聚合酶，模板，引物以及dNTPs进行体外扩增特定DNA片段的技术。

2.CDD分析软件：NCBI网站上提供的一种用来推测和分析特定氨基酸序列形成的结构域信息的软件。

本发明技术方案如下：

一种海洋模式生物文昌鱼类凝集素AmphiITLN239631的表达基因，核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

一种海洋模式生物文昌鱼类凝集素AmphiITLN239631，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

一种重组载体，插入了SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。该重组载体由pET-29b载体插入SEQ ID NO.1所示核苷酸序列获得。pET-29b载体购自德国Novagen公司。

一种重组细胞，转入了上述SEQ ID NO.1所示核苷酸序列或上述重组载体。

上述在文昌鱼类凝集素AmphiITLN239631的表达基因在凝集细菌中的应用。