[发明专利]用于前列腺癌早期诊断的引物对、探针和试剂盒

权利要求书

1.一种用于前列腺癌早期诊断的三组引物对，其特征在于：第一组引物对具有SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；第二组引物对具有SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列；第三组引物对具有SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列，所述三组引物对通过转录介导扩增技术来检测人体体内TMPRSS2:ERG、PCA3、PSA基因的表达水平，以判断前列腺癌发生的风险。

2.一种用于前列腺癌早期诊断的三个DNA探针，其特征在于：所述三个DNA探针分别具有SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列，且所述SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列上的*位置接有氨基酸自由基，所述氨基酸自由基上接有发光基团，所述SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列的 3’端标记有生物素。

3.如权利要求2所述的用于前列腺癌早期诊断的三个DNA探针，其特征在于：所述发光基团为吖啶酯。

4.如权利要求3所述的用于前列腺癌早期诊断的三个DNA探针的制备方法，其特征在于：在3’端标记有生物素、且具有SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列的DNA探针中*位置的氨基酸自由基上接上吖啶酯，具体步骤如下：

第一步，将吖啶酯溶于二甲基亚砜；

第二步，在水的参与下，所述溶于二甲基亚砜的吖啶酯与干燥的所述3’端标记有生物素、且具有SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列的DNA探针在20~45 °C、pH6~9条件下反应20~60 min，再用赖氨酸中止反应；

第三步，在第二步的所述用赖氨酸中止反应后的溶液中加入醋酸钠和糖原，混匀所述醋酸钠和糖原后，于加入无水乙醇，并在0°C以下反应5 min~10 h，离心除去上清，保留沉淀物；

第四步，所述沉淀物用水溶解后，用反相高效液相色谱纯化。

5.一种前列腺癌早期诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有

容器a1，容器a1中装有具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列、用于检测TMPRSS2:ERG基因表达水平的启动子引物；

容器a2，容器a2中装有具有SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列、用于检测TMPRSS2:ERG基因表达水平的反向引物； 

容器b1，容器b1中装有具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列、用于检测PCA3基因表达水平的启动子引物；

容器b2，容器b2中装有具有SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列、用于检测PCA3基因表达水平的反向引物；

容器c1，容器c1中装有具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列、用于检测PSA基因表达水平的启动子引物；

容器c2，容器c2中装有具有SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列、用于检测PSA基因表达水平的反向引物；

容器d，容器d中装有逆转录酶和RNA聚合酶的混合液；以及

固相载体，所述固相载体上涂有抗生蛋白链菌素，所述抗生蛋白链菌素上接有如权利要求2所述的DNA探针。

6.如权利要求5所述的前列腺癌早期诊断试剂盒，其特征在于：所述固相载体为96孔板。

7.如权利要求5所述的前列腺癌早期诊断试剂盒，其特征在于：所述抗生蛋白链菌素上接有如权利要求3所述的DNA探针。

8.如权利要求5所述的前列腺癌早期诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括：

容器e，容器e中装有由已知拷贝数的TMPRSS2:ERG、PCA3或PSA的mRNA转录物组成的标准品；和

容器f，容器f中装有由已知拷贝数的TMPRSS2:ERG、PCA3或PSA的mRNA转录物组成的对比品。

9.如权利要求5所述的前列腺癌早期诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括：

容器g，容器g中装有mRNA提取液。

10.如权利要求5所述的前列腺癌早期诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括：

容器h，容器h中装有杂交液；

容器i，容器i中装有选择液；

容器j，容器j中装有显色液。