[发明专利]一种快速检测小麦条锈菌新菌系V26的分子检测方法

权利要求书

1.小麦条锈菌新毒性菌系V26的特异性RAPD引物筛选和特异性引物的设计，其特征在于：

根据小麦条锈菌新菌系V26 DNA序列的特性，筛选到一个特异性的RAPD引物S1390（5’-TGGTCGGGTG-3’），利用该引物能稳定的扩增出条锈菌V26的特异性条带，经对该条带进行回收、纯化、克隆并测序，其长度约为1367bp：据此，设计了一对特异性引物，成功地将其转化为小麦条锈菌新菌系V26稳定的SCAR标记；

特异性引物碱基序列：

V26 SP-1：5'  CTGTAAAGCGGATAAAGGAA  3'；

V26 SP-2：5'  CATAAGAGCCACACTTGACC  3'。

2.小麦条锈菌新毒性菌系V26快速检测体系建立，权利要求1所述必须遵循以下程序：

 提取田间小麦叶片或采集的小麦条锈菌夏孢子基因组DNA；

 利用以下优化体系：15μL反应体系分别在PCR中依次放入：10×Buffer H 1.5μL、5U/μL的TaqDNA聚合酶0.15μL、25mmol/L的MgCl₂ 0.9μL、10mmol/L的dNTPs 0.3μL、10ng/μL的上游引物和下游引物各0.75μL、50ng/μL的DNA 1.5μL，最后用无菌去离子水补齐至15μL；

离心10sec，将PCR薄壁管放入PCR仪中扩增；

反应在PTC-100热循环仪（MJ RESEARCH，Inc.）上进行，扩增程序为： 第一循环94℃5min、然后 94℃1min、57℃1min、72℃90sec，共34个循环；最后一循环，72℃ 延伸10min，4℃终止，扩增完成；

；PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶、1×TAE电泳缓冲液电泳分析，电泳结束后用ULTRA—URLET PRODUCTS凝胶成像系统记录分析；大约在500bp处出现毒性菌系V26的特异性条带。