[发明专利]一种聚甜菜碱荧光标记剂及其制备方法

权利要求书

1.式Ⅰ所示聚甜菜碱荧光标记剂，

式Ⅰ

式Ⅰ中，R₁为氢或甲基；R₂为羧基或磺酸基；R₃为氢或甲基；FR为有机共轭荧光基团；X为O或NH，Y为O或NH；m为1~3之间的自然数，n为1~6之间的自然数，p为2~4之间的自然数；q₂为0.1~10之间的数，且q₁+q₂为50~2000之间的数。

2.根据权利要求1所述的聚甜菜碱荧光标记剂，其特征在于：m为2，n为1~3之间的自然数，p为2；q₂为0.5~0.7之间的数，且q₁+q₂为150~1121之间的数。

3.根据权利要求1或2所述的聚甜菜碱荧光标记剂，其特征在于：所述FR的结构式如式Ⅱ所示，

式Ⅱ

式Ⅱ中，R₄为氢、甲基或乙基；R₅为氢或甲基；R₆为NH₂、NH(CH₂CH₃)、N(CH₂CH₃)₂或OH。

4.式Ⅰ所示聚甜菜碱荧光标记剂的制备方法，包括如下步骤：

（1）将式Ⅲ所示甜菜碱单体溶于缓冲溶液中，其中所述缓冲溶液的pH值为6.0～8.0；

式Ⅲ

式Ⅲ中，R₁、R₂、X、m和n的定义同式Ⅰ；

（2）在惰性气氛下，向步骤（1）得到的溶液中加入引发剂、链转移剂、式Ⅳ所示荧光共聚单体和无机盐，经聚合反应即得式Ⅰ所示聚甜菜碱荧光标记剂；

式Ⅳ

式Ⅳ中，R₃、Y、P和FR的定义同式Ⅰ。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）得到的溶液中，式Ⅲ所示甜菜碱单体的摩尔浓度为0.3~1.0mol L^-1；所述缓冲溶液为磷酸盐类缓冲溶液。

6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述引发剂为偶氮类化合物或无机过氧化合物；

所述偶氮类化合物为含羧基的偶氮类化合物；

所述机过氧化合物为过硫酸钾-硫代硫酸钠或过硫酸钾-亚硫酸钠；

所述链转移剂为双硫酯或三硫酯；

所述无机盐为NaBr、NaCl、KCl和/或KBr。

7.根据权利要求4-6中任一项所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述聚合反应的温度为60~70℃，时间为5~30小时；

式Ⅲ所示甜菜碱单体与式Ⅳ所示荧光共聚单体的摩尔比为（50～5000）：1，式Ⅲ所示甜菜碱单体与所述链转移剂的摩尔比为（50～2000）：1，所述链转移剂与所述引发剂的摩尔份数比为（5～20）：1。

8.根据权利要求4-7中任一项所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）之后，所述方法还包括后处理步骤；

所述后处理步骤为：将所述聚合反应完毕后的体系加入至有机溶剂中，得沉淀物，经分离、干燥即得所述聚甜菜碱荧光标记剂；所述有机溶剂的体积用量为所述聚合反应体系的7~10倍。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述方法还包括对所述聚甜菜碱荧光标记剂进行透析的步骤；

所述透析步骤为：将所述聚甜菜碱荧光标记剂溶解与NaBr水溶液中，然后加入至透析袋中，再置于去离子水中于15℃～50℃的条件下进行透析，然后经冷冻干燥即得。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：所述透析袋的截留分子量为3.5kDa～14kDa；所述NaBr水溶液的浓度为0.05~0.1mol L^-1；所述透析的时间为2~4天。