[发明专利]一种鳗弧菌重组蛋白的应用

说明书

技术领域

本发明涉及疫苗学领域，具体的说是一种鳗弧菌重组蛋白的应用。 

背景技术

国际水产养殖业的发展表明疫苗是养殖鱼类病害防控最为有效的措施之一。目前鱼类疫苗主要包括灭活疫苗、重组亚单位疫苗、核酸疫苗、减毒疫苗等类型，其中亚单位疫苗的应用通常需要免疫佐剂。疫苗佐剂是非特异性的免疫因子/试剂，其主要功能是协助疫苗刺激免疫系统产生反应，从而增强疫苗诱发的特异性免疫保护效应。研究表明细菌的鞭毛蛋白能够通过与Toll样受体结合而激活天然免疫系统，因此具有免疫佐剂的潜能。鳗弧菌（Vibrio anguillarum）属于革兰氏阴性菌，是弧菌病的诱发因子。鳗弧菌表达5个鞭毛蛋白，即FlaA，FlaB，FlaC，FlaD，和FlaE，但这些鞭毛蛋白的免疫效应尚不清楚。我们在前期研究中发现鳗弧菌鞭毛蛋白FlaE能够显著提高亚单位疫苗的免疫保护效应，因此具有良好的疫苗佐剂功能。 

发明内容

本发明目的在于提供一种鳗弧菌重组蛋白的应用。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为 

一种鳗弧菌重组蛋白的应用，鳗弧菌重组鞭毛蛋白FlaE作为非特异性免疫疫苗佐剂的应用。 

所述鳗弧菌重组鞭毛蛋白FlaE重组过程为，以鳗弧菌C312为模板，采用EF/ER为引物进行PCR扩增,PCR产物与载体pET259连接，连接液转化入大肠杆菌DH5α，筛选质粒pEFlaE，质粒pEFlaE转化大肠杆菌BL21(DE3)，即得到鞭毛蛋白FlaE；所述引物为FE：5’-CCCGGGATGGCAATTACCGTTAATAC-3’；RE：5’-CCCGGG GCGAAGTAAGGCCAATG-3’。 

本发明具有如下优点：本发明的鳗弧菌鞭毛蛋白作为佐剂可提高疫苗的保护效应至20％以上。 

附图说明

图1为本发明实施例提供的纯化的鞭毛蛋白（泳道2）。泳道1，分子量标准。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。在本发明实施例中所涉及到的常规性实验方法均采用如下方法： 

1.质粒提取、DNA(PCR)产物纯化皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相应试剂盒。 

2.质粒、DNA连接液转化进入大肠杆菌皆用Hanahan方法（Sambrook and Russell:Molecular Cloning:A Laboratory Mannual.Cold Spring Harbor Laboratory Press 2001）； 

3.所有限制性内切酶和连接酶皆购自于“北京，纽英伦生物技术有限公司”。 

实施例1 

鳗弧菌鞭毛蛋白为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示（参见序列表1）。 

序列表1 

MAITVNTNVSALIAQRHLGSASEMLNQSLERLASGKRINSAKDDAAGLQISNRLESQMRGLDVAVRNANDGISIMQTAEGAMQETTSLLQRMRDLSLQSANGANSKADRQALQEEMGALNDELNRIAETTSFGGRKLLNGSFGQSSFQIGASSGEAVQVSLKNMRSDSLDMGGFSYVAAGMADSQWRVTQDNRQLTMSYTDAKGKQHNIQIQAKVGDDIEELATYINGQTDKVSASVNDKGQLQLFMAGKETSGTIDFKGSLANQLQMNVTGYEAVDTLDITEVGGAQRAVAVIDTAMQYVDSHRSELGALQNRFNHAINNLDNVHENLASSNSRIKDTDYAKETTQMVKQQILQQVSTSILAQAKKQPNLALALLR 

（a）序列特征： 

●长度：377 

●类型：氨基酸序列 

●链型：单链 

●拓扑结构：线性 

（b）分子类型：蛋白质 

（c）假设：否 

（d）反义：否 

（e）最初来源：鳗弧菌C312 

（f）特异性名称：鞭毛蛋白FlaE