[发明专利]一种测定液中淀粉样前体蛋白的方法

权利要求书

1.一种测定血液中淀粉样前体蛋白(APP)的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

从手臂静脉抽血2-3ml至无菌的1∶9的枸橼酸钠抗凝管，后置-20℃冰箱保存；

测定时，取1ml血液，10000g离心3分钟，小心移去上清，保留沉淀物待用；

细胞沉淀物加120ul蛋白抽提液，漩涡混合，置于冰上静止20min，12000g离心3分钟，取上清；

进行Western免疫印迹实验，并观察结果，病情的严重程度与条带的浓淡成正比。

2.如权利要求1所述的测定血液中淀粉样前体蛋白(APP)的方法，其特征在于，Western免疫印迹实验的方法，该方法包括：

200ug蛋白进行12％SDS-PAGE凝胶电泳，以蛋白电泳转移仪将产物转至PVDF膜上，室温下封闭2h；

TBST溶液漂洗PVDF膜两遍；加入兔抗APP(N-端)的一抗缓冲液，室温孵育1h；

移去一抗，用TBST溶液洗涤3次；加入碱性磷酸酶标记的羊抗兔二抗缓冲液，室温下孵育1h；

移去二抗缓冲液，TBST溶液洗涤3次；

NBT/BCIP储存液显色试剂盒进行显色，扫描仪取像，以人β-actin蛋白作为内参。