[发明专利]苏木药材及其制剂的HPLC指纹图谱的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药指纹图谱的建立方法，具体是苏木药材及其制剂的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱的构建方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

苏木（Caesalpinia sappan L.）为豆科植物的干燥心材，是一种亚洲各国常用的古老的天然药材。在临床上主要用于治疗心血管疾病，如老年中风、消栓止痛，跌打损伤、经血不调、消炎等，并被作为一种红色染料所使用。

中药指纹图谱是指某种中药材及其制剂中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。在现阶段，中药的有效成分绝大多数没有得到明确，指纹图谱的建立对于有效控制中药材及其制剂的质量具有十分重要的意义。对于苏木药材，由于其成分的复杂，具体某一成分都不能真正反映药材的质量，而综合研究其指纹图谱以控制质量的还未有统一标准。

因此，目前存在能够全面表征苏木药材及其制剂的成分特征的指纹图谱的要求，苏木的质量控制方法和质量控制标准也有待于进一步完善。

发明内容

    本发明的目的是为准确的分析测定苏木药材及其制剂中的主要成分相对含量，通过含量可以有效可靠地预测动物实验的药效或临床疗效，提供了一种苏木药材及其制剂的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱的构建方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种苏木药材及其制剂的HPLC指纹图谱的构建方法，所述的构建方法包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：制备苏木药材提取液，获得提取液供试品溶液；或者稀释定容苏木制剂，获得制剂供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备：精密称取巴西苏木素，加甲醇混合，获得对照品溶液，该溶液中巴西苏木素的含量为40μg/ml；或者精密称取原苏木素B，加甲醇混合，获得对照品溶液，该溶液中原苏木素B的含量为40μg/ml；

（3）供试品指纹图谱的构建：色谱条件：Hypersil C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；检测波长250～285nm，流动相流速为1.0mL·min^-1，柱温为室温；流动相A为甲醇，流动相B为体积百分比为0.1%的冰醋酸水溶液，流动相A与B的体积比为：24：76；在上述色谱条件下，精密吸取供试品溶液5μl进样量，进行高效液相色谱分析，得到苏木药材或其制剂的指纹图谱；

（4）对照品指纹图谱的构建：色谱条件：Hypersil C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；检测波长250～285nm，流动相流速为1.0mL·min^-1，柱温为室温；流动相A为甲醇，流动相B为体积百分比为0.1%的冰醋酸水溶液，流动相A与B的体积比为：24：76；在上述色谱条件下，精密吸取对照品溶液5μl进样量，进行高效液相色谱分析，得到对照品溶液的指纹图谱。

所述的苏木药材提取液的制备方法采用的是本领域公知的药材有效成分的提取方法，例如水提、有机溶剂提取。

所述的苏木制剂为本领域公知的药用制剂，例如针剂、粉针剂、外用洗液剂、外用膏剂、透皮吸收剂、栓剂、靶向制剂、肠溶胶囊剂、水丸等。上述药用制剂的制备方法采用的是本领域公知的制剂制备方法。

在以下的实验中，未详细描述的各种过程、方法、仪器、试剂是本领域公知的常规方法。

实验一：不同检测波长的高效液相色谱法指纹图谱分析考察

1.1仪器与试剂

高效液相色谱仪，水为超纯水。对照品巴西苏木素和原苏木素B均购于中国食品药品检定研究院，巴西苏木素（批号111881-201001，纯度90.4%），原苏木素B（批号111882-201001，纯度84.1%）。

1.2供试品溶液的制备

精密称取15mg粉针剂，用水稀释定容至100ml，摇匀，获得粉针剂供试品溶液。

1.3对照品溶液的制备：

精密称取巴西苏木素，加甲醇混合，获得对照品溶液，该溶液中巴西苏木素的含量为40μg/ml。

1.4指纹图谱分析

1.4.1供试品溶液的指纹图谱分析

色谱条件：Hypersil C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；检测波长分别为285nm、270nm、260nm、250nm，流动相流速为1.0mL·min^-1，柱温为室温；流动相A为甲醇，流动相B为体积百分比为0.1%的冰醋酸水溶液，流动相A与B的体积比为：24:76；在上述色谱条件下，精密吸取供试品溶液5μl进样量，进行高效液相色谱分析。

1.4.2对照品溶液的指纹图谱分析