[发明专利]一种测定维生素B12含量的色谱方法

说明书

技术领域

本发明涉及保健食和药品测试领域，尤其涉及测定保健食品和药品中微量维生素B12含量的色谱方法。

背景技术

维生素B12，是人体必需的微量营养成分之一，若摄取不足，则可能引起恶性贫血，骨髓变性，舌炎，神经系症状，四肢僵硬，易受刺激，困倦，精神不振等。为补充人体所需要的维生素B12，目前许多保健食品添加维生素B12，但维生素B12在食品和一些基质成分复杂的保健品中含量很低，这对维生素B12 的测定造成很大困难。

目前维生素B12 的测定方法已有微生物分析法、分光光度法和色谱法。微生物法不能准确区分维生素B12及其类似物，测定结果不精确，且费时费力，操作复杂，对人员技术要求高；分光光度法不适合复杂基质的样品，因为有很多组分光谱峰重叠，不是简单的几次求导就能区分开来的；目前建立的色谱法主要是应用高效液相色谱法（HPLC），采用甲醇-水体系为流动相，对维生素B12进行检测，检测出现维生素B12组分无法出峰或出峰不明显无法达到测定要求的现象。较微生物法和分光光度法相比，已有的HPLC方法在一般检测过程中提高了灵敏度和准确度，但对于一些组分复杂且维生素B12含量低的保健品，比如只有几个ppm，进行测定时，需要对维生素B12进行提前富集，若直接进行采样测定则导致无法找到对应峰或出峰很小，重复性不高，从而达不到检测要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定保健食品中维生素B12的色谱方法，通过选择新型流动相和与之配套的其他检测条件，实现直接对复杂基质保健食品和药品中微量维生素B12含量的准确测定和计算。

本发明是这样实现的：一种测定保健食品中维生素B12的色谱方法，其特征在于包括以下步骤：（1）流动相制备：称取一定量的磷酸二氢钾，置于容量瓶中，加去离子水溶解后，加85%磷酸配制浓度为0.04 M、pH 为3.5±1.5 的磷酸钾盐缓冲溶液，将上述缓冲溶液与甲醇按照缓冲溶液：甲醇=69:31的体积比的混合均匀，制成流动相；（2）对照品溶液制备：采用USP标准品作为维生素B12对照品，精密称定一定量的维生素B12对照品，用流动相溶解，配制成浓度为0.01 mg/mL的储备液，每次试验前用流动相稀释储备液，配制成浓度为1 μg/ml的标准工作溶液；（3）供试样品溶液制备：取适量待测样品，研成细粉，精密称定约含有25 μg维生素B12的样品粉末，置于50mL棕色容量瓶中，精密加入25 mL流动相溶解，用力震摇，提取2分钟，用0.45 μm滤膜过滤；（4）色谱条件设定：

a. 色谱柱：采用反相C18色谱柱，5 μm ，250 mm ×4.6 mm；b. 流速：0.5-1.5 mL/min；c. 检测器及检测波长：二极管阵列检测器，波长为546 nm；d. 进样量：70-150 μL；e. 柱温：25-35 °C；（5）进样检测：通过供试样品与对照品的保留时间和溶液峰面积关系，按如下方程计算供试样品中维生素B12的含量：ω_样= C_对×A_样×25/ A_对×m_样，其中ω_样为供试样品中维生素B12的含量，单位为μg/g；C_对为对照品标准浓度；A_对为对照品标准溶液峰面积；A_样为供试样品溶液峰面积；m_样为供试样品的重量,单位为g。

本发明所述的流动相也可应用磷酸钠盐和其他基质配制缓冲溶液。

本发明通过选择新型流动相和与之配套的其他检测条件，实现直接对复杂基质保健食品中微量维生素B12含量的准确测定和计算，检测结果色谱峰形好，抗干扰能力强，满足实际测定要求。

附图说明

图1原有HPLC方法对照品色谱图。

图2原有HPLC方法供试样品色谱图。

图3 本发明对照品色谱图。

图4本发明供试样品色谱图。

具体实施方式