[发明专利]一种使醋杆菌种富集钙的驯化培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，具体涉及一种使醋杆菌种富集钙的驯化培养方法。

背景技术

钙是人体的生命之源，是人体骨骼的主要成份，是人体不可缺少的微量元素，人生各个阶段都必须注重钙的摄入和吸收。人体一旦缺钙，便会导致牙龈出血，皮下出血点，骨质疏松等现象，而且钙离子对人体内分泌腺激素的分泌有决定性的作用，对呼吸、消化、泌尿、神经、内分泌、生殖等系统器官的功能至关重要，钙既是身体的构造者，又是身体的调解者。

人类通过食物来摄取身体所需的钙元素，通常成年人每天摄入的钙约为450-500毫克，然而人体代谢过程中每天大约要排出700-800毫克的钙，为维持身体的收支平衡，补钙已引起全民重视。如何提高饮食中的钙含量已经成为不可忽视的问题，现有的补钙产品众多，其中无机钙价格低廉，但是其吸收效率底下，难以与常规食品配合食用；其他采用有机钙的补钙产品虽然吸收效果较好，但是由于其制备方法较为苛刻，使其成本较高，难以广泛的推广应用，无法满足普通民众对于钙源的需求；一般的发酵菌种中含钙量较低，直接应用于食品加工和饲料加工时所能提供的有机钙源少，无法满足生产的要求，同时越来越多的科研表明通过驯化等手段可以改变菌种的某些特性，但是如何将驯化这一培养方式应用于富集钙的生产实践中一直是难以突破的技术难题。

发明内容

本发明针对现有技术存在的不足之处，提供了一种使醋杆菌种富集钙的驯化培养方法，该方法采用常用的巴氏醋杆菌，通过改变培养基配比和培养方法，使得现有的巴氏醋杆菌可以实现钙的富集，进而获得高钙含量的菌体和菌液，该菌体和菌液可以用于多种饲料添加剂中，应用到禽畜饲养中时可以大大提高畜禽体内的钙含量，促进畜禽的生长，改善禽畜肉类产品的品质。

本发明的具体技术方案是：具体步骤如下：

（1）驯化初级菌液的制备

取500ml三角瓶，每瓶装驯化培养液150ml；灭菌后在30±1℃和无菌条件下，向每个三角瓶中接入醋杆菌0.1g，将三角瓶密封，放入回旋式摇床中培养，转速90－110rpm，温度30±1℃，培养45小时结束即可获得驯化初级菌液；其中所述的驯化培养液为：

牛肉膏4g，碳酸钙30g，磷酸二氢钙25g，玉米粉10g，无水氯化钙0.3g，磷酸二氢钾0.25g，玉米浆干粉5g，葡萄糖15g，加水1000ml后混合均匀既得；

所述的醋杆菌选自中科院微生物研究所提供的巴氏醋杆菌，编号为：Accc10600或Accc 10112；

（2）一级种子液的制备：

取250ml三角瓶，每瓶装培养液100ml，灭菌后在30℃±1℃和无菌条件下，每个三角瓶接入步骤（1）中获得的驯化初级菌液10ml，将三角瓶密封，放入回旋式摇床中培养，转速每分钟120-130转，温度30℃-32℃，培养25-30小时既得一级种子液；其中所述的培养液中各组分的重量百分比为：酪蛋白胨5％，牛肉膏5％，碳酸钙3％，磷酸氢钙2％，玉米粉2％，磷酸二氢钾0.3％，玉米浆干粉0.4％，葡萄糖2.3％，水80％；

（3）种子罐培养菌种液的获得：

将种子罐培养液加入到已经灭菌的种子罐中，然后通入蒸气加热，利用夹层蒸气加热到90℃-95℃时改用直接蒸气加热，当种子罐中蒸气压力达到0.11-0.12兆帕时，保温25-30分钟即可达到灭菌效果；然后关闭蒸气，待种子罐降温至28℃-30℃之间时，将步骤（2）中获得的一级种子液按照种子罐培养液重量1%的用量加入到种子罐中，然后盖好接种帽，开始无菌空气通风发酵，无菌空气用量为每100公斤培养液每分钟用无菌空气0.05-0.1立方，pH值自然，转速每分钟120-130转，发酵时间为25-30小时，检测OD值应达到0.1毫升，OD600mm＝1即可停止发酵，获得种子罐培养菌种液；

其中所述的种子罐培养液中各组分的重量百分比为：酪蛋白胨3％，牛肉膏3.5％，葡萄糖0.5％，酵母膏3％，碳酸钙2％，磷酸氢钙1％，玉米粉1％，磷酸二氢钾0.2％，玉米浆干粉0.2％，水85.6%；

（4）发酵罐培养：