[发明专利]氨基酸注射液中胱氨酸、半胱氨酸及其盐的含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种胱氨酸、半胱氨酸及其盐的含量测定方法，尤其涉及一种测定氨基酸注射液中的胱氨酸、半胱氨酸及其盐的含量的方法。

背景技术

胱氨酸是人体内一种非必需氨基酸，它在体内浓度增高被认为是动脉粥样硬化的始动因素，其中，同型半胱氨酸与心血管疾病（冠动脉病变、高血压）、神经系统疾病（脑中风）、糖尿病、肾病、妊娠相关疾病、老年痴呆症等的发生有密切联系。本世纪60年代末期，一些学者注意到患有遗传性高胱氨酸尿症的病人，大多数伴有亚临床心血管病。1976年，Wichen等通过流行病学调查提出同型半胱氨酸是心血管病人一个独立危险因素，但一直未受到人们重视。近年来，通过分子水平研究同型半胱氨酸在心血管发病中的作用已重新引起人们的关注。动物试验表明，应用3％蛋氨酸饮食长期喂养家兔，诱发同型半胱氨酸血症。家兔血中甘油三酯、游离脂肪酸、脂质过氧化物含量均明显升高，病理检查表明主动脉脂肪大量沉积，并发生动脉粥样硬化。Glueck等报道，他们对482例高血脂病人进行分析，18例患者同时伴有血浆同型半胱氨酸含量升高。其中13人患有动脉粥样硬化，发病率为72％，远高于血浆同型半胱氨酸含量正常的高血脂患者。在18例高同型半胱氨酸血症患者的直系亲属中动脉粥样硬化的发病率可达78％。目前关于高同型半胱氨酸血症诱发动脉粥样硬化的机制尚不了解。可能有多方面因素起作用。田学军等报道，同型半胱氨酸可以促进大鼠血管平滑肌细胞增殖，诱导血管平滑肌细胞中新的mRNA生成。另外，同型半胱氨酸可以抑制内皮细胞增殖，促进氧自由基的生成，加速低密度脂蛋白的氧化，并可激活血小板的粘附和聚集。总之，同型半胱氨酸是诱发心血管疾病的一个独立危险因素。

目前，分析氨基酸营养注射液中胱氨酸、半胱氨酸及其盐的含量的方法一般是采用waters衍生法，该方法具有以下不易克服的缺点：1）该方法采用专用的AccQ-FluorTM试剂，由于其处于垄断地位，因此试剂价格比较昂贵；2）在分析时采集胱氨酸、半胱氨酸及其盐的过程中，其他氨基酸也同时被采集，使得分析过程中未知峰较多，被采集的其他物质对胱氨酸、半胱氨酸及其盐的含量分析造成干扰；3）其他被采集的物质同时也影响分析的灵敏度。

发明内容

针对以上不足，本发明提供一种低廉、快速及灵敏度高的测定氨基酸注射液中的胱氨酸、半胱氨酸及其盐的含量的方法。

本发明通过以下方案达到上述目的：

一种氨基酸注射液中胱氨酸、半胱氨酸及其盐的含量测定方法，该方法包括精密量取被测样品及对照品溶液，加入0.1～1%的焦亚硫酸钠溶液0.2ml，摇匀，置70～100℃水浴加热10～60分钟，取出，各加1.5ml甲酸及30％过氧化氢溶液1.0ml，摇匀，再于30℃±2℃温度中放置30分钟后加水至刻度，摇匀，取被测样品注入带阳离子交换树脂柱的色谱仪，通过专用流动相A6溶液及氢氧化钠再生液进行梯度洗脱与再生平衡，专用衍生试剂茚三酮溶液进行柱后衍生反应，在检测波长为570nm下记录色谱图，按外标法以峰面积计算即得。

其中，专用流动相A6溶液的配制为：取二水合柠檬酸三钠12.0g、氯化钠7.6g、柠檬酸6.0g、硼酸1.0g、甲醇120ml、37%盐酸7.78ml、辛酸0.1ml置1000ml量瓶中，加水定容至刻度，调pH值至2.0～4.0。

专用氢氧化钠再生液的配制为：取氢氧化钠18.0g置1000ml量瓶中，加水定容至刻度。

专用衍生试剂茚三酮溶液的配制为：取茚三酮20g、苯酚2g、甲醇600ml，搅拌溶解，再加入钾钠缓冲液（pH5.51）400ml，混匀。

其中，钾钠缓冲液（pH5.51）：取三水乙酸钠272.0g、醋酸钾196.0g，加入400ml水中，边加边搅拌，同时加入200ml乙酸，使其溶解，最后加水定容至1000ml。

进一步的，一种氨基酸注射液中胱氨酸、半胱氨酸及其盐的含量测定方法，包括步骤为：

1）制备对照品溶液：精密称取对照品，加水制成每1ml中含有1mg的对照品溶液；

2）过甲酸氧化处理被测样品及对照品溶液：精密量取被测样品及对照品溶液各1.0ml分别置100ml量瓶中，加入0.1～1%的焦亚硫酸钠溶液0.2ml，摇匀，置70～100℃水浴加热10～60分钟，取出，各加甲酸1.5ml及30％过氧化氢溶液1.0ml，摇匀，再于30℃±2℃温度下放置30分钟后加水至刻度，摇匀；