[发明专利]一种固相合成GLP-1类似物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽固相合成领域，具体地说涉及一种固相合成GLP-1(胰高血糖素样肽-1)类似物的方法。 

背景技术

随着细胞和分子生物学的发展，肠促胰素这层神秘的面纱被慢慢揭开，研究证实，肠促胰素是人体内一种肠源性激素，肠促胰素以葡萄糖浓度依赖性方式促进胰岛β细胞分泌胰岛素，并减少胰岛α细胞分泌胰高血糖素(glucagon)，从而降低血糖。正常人在进餐后，肠促胰素开始分泌，进而促进胰岛素分泌，以减少餐后血糖的波动。但对于2型糖尿病患者，其“肠促胰素效应”受损，主要表现为进餐后胰高血糖素样肽-1（GLP-1）浓度升高幅度较正常人有所减小，但其促进胰岛素分泌以及降血糖的作用并无明显受损，因此GLP-1及其类似物可以作为2型糖尿病治疗的一个重要靶点。GLP-1主要通过以下几方面发挥降糖作用。GLP-1具有保护β细胞的作用 GLP-1可作用于胰岛β细胞，促进胰岛素基因的转录、胰岛素的合成和分泌，并可刺激胰岛β细胞的增殖和分化，抑制胰岛β细胞凋亡，增加胰岛β细胞数量。此外，GLP-1还可作用于胰岛α细胞,强烈地抑制胰高血糖素的释放，并作用于胰岛δ细胞，促进生长抑素的分泌，生长抑素又可作为旁分泌激素参与抑制胰高血糖素的分泌。研究证明，GLP-1可通过多种机制明显地改善2型糖尿病动物模型或患者的血糖情况，其中促进胰岛β细胞的再生和修复，增加胰岛β细胞数量的作用尤为显着，这为2型糖尿病的治疗提供了一个非常好的前景。 

然而，要将GLP-1应用于临床也面临着问题，那就是人体自身产生的GLP-1 极易被体内的二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)降解，其血浆半衰期不足2分钟，必须持续静脉滴注或持续皮下注射才能产生疗效,这大大限制了GLP-1的临床应用。为解决这一难题，学者们已经提出两种方案：一是开发GLP-1类似物，让其既保有GLP-1的功效，又能抵抗降解：二是开发DPP-Ⅳ抑制剂，使体内自身分泌的GLP-1不被降解，维持GLP-1的功效。 

目前市场上的GLP-1类似物通用名为艾塞那肽，英文名Exenatide，化学结构式为：His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂；分子式：C₁₈₄H₂₈₂N₅₀O₆₀S；分子量：4186.61。 

传统的固相逐步合成法都是将一个一个保护氨基酸顺序偶联。但是，在多肽合成时往往有一些位点由于多肽长链的折叠和氨基酸的空间位置限制，往往使连接下一个氨基酸的反应难以进行或难以完全。在合成超过二十个氨基酸以后，特别是合成困难的多肽键时，产生以残基缺失为主的寡肽副产品含量显着增加并不断积累，由于这些寡肽副产品与目标肽在分子量、溶解性、极性和结构上很相似，难以纯化。 

申请号为200710044421.4的中国专利，公开了一种固相多肽合成EXENATIDE的制备方法，该发明提供了一种固相多肽合成EXENATIDE的制备方法:以RINK AMIDE树脂、RINKAMIDE AM树脂或RINK AMIDE MBHA树脂为起始原料,依次连接具有FMOC保护基团的氨基酸,获得保护的三十九肽树脂,其间依次脱去FMOC-保护基团，用缩合剂,进行接肽反应,得保护的三十九肽树脂后,同步进行脱侧链保护基团及切肽,获得EXENATIDE粗品,并经C18或C8柱进行分离纯化,再经冷冻干燥,获得产品。该发明的合成方法属于传统的一个一个保护氨基酸顺序偶联，没有解决由于连接困难或是连接不完全而产生性质非常相似的缺失肽等副反应，导致纯化困难等问题。 

发明内容

    为解决固相合成GLP-1类似物过程中氨基酸顺序连接困难或不完全造成而产生性质非常相似的缺失肽和副产品，导致后续纯化的时不能分离副产品的问题，本发明提出一种固相合成GLP-1类似物的方法，该方法在难连接点，采用片段缩合和引入取代基的方法，提高了多肽合成的收率。 

本发明是通过以下步骤实现的：一种固相合成GLP-1类似物的方法，所述的合成方法为以下步骤：