[发明专利]一种通用的CaMV 35S启动子定量检测方法

权利要求书

1.一种通用CaMV 35S启动子定量检测方法，其特征在于：

①收集CaMV 35S启动子增强子保守区序列：

收集GMDD（GMO Detection Method Database，转基因检测方法数据库，http://gmdd.shgmo.org/）所公布的不同转化事件来源的CaMV 35S启动子序列，通过其序列比对结果，以其增强子序列的保守区为检测靶标，其序列特征是：

由来源于野生型CaMV 35S启动子第7018至7344个碱基组成，如图1所示：

②利用该序列特征设计引物探针：

a、合成引物序列如下：

35SEnhF187：5’CATCATTGCGATAAAGGAAAGGC 3’和35SEnhR311：5’TGCTTTGAAGACGTGGTTGGA 3’；

b、合成TaqMan探针序列如下：

35SEnhFP230：5’FAM－CCGACAGTGGTCCCAAAGATGG－BHQ13’；

③PCR扩增：

提取样品总DNA，分别利用上述引物35SEnhF187/35SEnhR311和探针35SEnhFP230组合进行荧光定量PCR扩增；

④建立标准曲线：

以含有CaMV 35S启动子的转基因油菜OXY235基因组DNA为研究模型，利用相同浓度非转基因油菜基因组DNA稀释至不同含量，以100ng的混和油菜基因组DNA为模板，进行荧光定量PCR反应并建立标准曲线；

⑤定量体系的精确性验证：

以标准曲线为参照测定含有OXY235基因组DNA的混和油菜基因组DNA样品中CaMV 35S启动子的量。