[发明专利]伤寒、甲型副伤寒沙门菌荧光定量PCR检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌荧光定量PCR检测试剂盒，包含第一反应液、第二反应液及石蜡，所述第一反应液包含：反应缓冲液；针对伤寒沙门菌的引物对和特异性探针，所述针对伤寒沙门菌的引物对序列为SEQ IDNO：1和SEQ ID NO：2，所述针对伤寒沙门菌的特异性探针序列为SEQ ID NO：3；以及针对甲型副伤寒沙门菌的引物对和特异性探针，所述针对甲型副伤寒沙门菌的引物对序列为SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5，所述针对甲型副伤寒沙门菌的特异性探针序列为SEQ ID NO：6，所述第二反应液包含DNA聚合酶O。

2.如权利要求1所述的伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述针对伤寒沙门菌的特异性探针SEQ ID NO：3和针对甲型副伤寒沙门菌的特异性探针SEQ ID NO：6的5’端连接有FAM或HEX，3’端连接有DABCYL或BHQ。

3.如权利要求1所述的伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液含有25mM的MgCl₂、不含镁离子的10×buffer和dNTPs。

4.如权利要求1所述的伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述第二反应液还包含显色液。

5.如权利要求1所述的伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述第一反应液和所述第二反应液被所述石蜡隔开。

6.如权利要求1所述的伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述针对伤寒沙门菌的引物对SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：2，所述针对伤寒沙门菌的特异性探针序列SEQ ID NO：3，以及针对甲型副伤寒沙门菌的引物对SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5，所述针对甲型副伤寒沙门菌的特异性探针序列SEQ ID NO：6在与所述第一反应液中其他组分混合前浓度为45-55μM。

7.如权利要求1所述的伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶O在与所述第二反应液的其他组分混合前的浓度为40-44U/μL。

8.如权利要求1至7中任一项所述的伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌荧光定量PCR检测试剂盒在伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌检测中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌检测包括PCR反应，所述PCR反应条件为：

50-55℃：2-5min；

94-95℃：2-3min；

94-95℃：5-10s，55-60℃：40-80s；40个循环。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌检测包括利用全血直接进行PCR反应的步骤。