[发明专利]死亡受体5激动性多价抗体及其在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及死亡受体激动性抗体的制备，具体为死亡受体5激动性多价抗体的制备及其在抗肿瘤药物方面的应用。

背景技术

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（Tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand, TRAIL）是willy等于1995年发现的TNF超家族新成员。实验证实TRAIL对几乎所有系统恶性肿瘤的大部分细胞系均有杀伤作用, 而对正常组织无杀伤作用（Nat Med, 1999, 5: 157-63）,  因此以 TRAIL 受体为靶点的肿瘤治疗已成为研究的热点。

TRAIL的生物学效应主要是通过与细胞膜上的相应受体结合而产生的。目前在细胞膜已发现4种TRAIL受体: 二种为死亡受体: DR4 (Death receptor-4)、DR5 (Death receptor-5)，二种受体为诱骗受体: DcR1 (Decoy receptor-1)、DcR2 (Decoy receptor-2)。当TRAIL与死亡受体DR4与DR5结合后，DR4与DR5可以形成同源/异源三聚体，通过其含有的胞内死亡结构域(death domain, DD)传导凋亡信息至胞质内, 激活caspase系统最终引起细胞凋亡。TRAIL与诱骗受体DcR1与DcR2结合后，可以形成异源三聚体。由于DcR1、DcR2缺乏有功能的胞内死亡结构域, 形成的异源三聚体无法激活caspase系统, 因此当诱骗受体过表达时, 细胞对TRAIL诱导的凋亡产生耐受。

肿瘤细胞通常主要表达死亡受体，低表达诱骗受体。然而有些肿瘤细胞却可以高表达诱骗受体，对TRAIL诱导的凋亡产生耐受[Science,1997, 277: 818–821; Cell Signal, 2004, 16:139-44]。为此有些研究小组研发出单死亡受体激动性抗体，这些抗体与DR4或DR5特异性结合后, 模拟TRAIL的作用, 诱导肿瘤细胞凋亡。由于激动性抗体只与死亡受体特异性结合, 而不与诱骗受体结合, 因此对于那些高表达诱骗受体、躲避TRAIL杀伤作用的肿瘤细胞仍然有效[Oncogene. 2008, 27: 6207-15; Curr Opin Pharmacol, 2008, 8: 433–439] 。

发明内容

本发明目的在于提供死亡受体5激动性多价抗体，尤其是死亡受体5激动性四价抗体在制备抗肿瘤药物方面的应用。

死亡受体5多价抗体，针对死亡受体5的单链抗体通过寡聚化的结构域，形成多价抗体，该多价抗体可以诱导肿瘤细胞的凋亡，对正常细胞无毒性，其氨基酸序列为（详见SEQ ID NO.1）：

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所述的死亡受体5多价抗体，针对死亡受体5的单链抗体通过p53结构域连接，形成四价抗体，该四价抗体可以诱导肿瘤细胞的凋亡，对正常细胞无毒性，其氨基酸序列为（详见SEQ ID NO.2）：

DIVMTQSPSSLAVSAGERVTMSCKSSQSLLNSRTRKNCLAWYQQKPGQFPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQQSFDLPTFGGGTKLELKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGAEPVKSGASVKLSCTASGFNIKDTFIHWVKQRPEQGLEWIGRIDPANGNTKYDPKFQGKATITADTSSNTVYLQFSSLTSEDAAVYYCSRGTTVYYFDHWGQGSTLTVSSTPLGDTTDTSGKPLDGEYFTLQIRGRERFEMFRELNEALELKDAQAGKEP。

所述的死亡受体5多价抗体，其氨基酸序列与SEQ ID NO.2的同源性大于80%，且可以形成四价抗体，与死亡受体5结合, 诱导肿瘤细胞的凋亡，对正常细胞无毒性。

所述的死亡受体5多价抗体在制备抗肿瘤药物中的应用。