[发明专利]葡萄球菌肠毒素C化学发光酶联免疫分析检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，涉及一种超抗原检测的试剂盒，特别是一种葡萄球菌肠毒素C化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，该试剂盒利用双抗体夹心化学发光酶联免疫分析法来定量检测食品中尤其是牛奶中的金黄色葡萄球菌肠毒素C含量。

背景技术

食品安全与人类健康密切相关，食品安全问题已成为社会关注的热点问题。借助于免疫学技术的发展，构建完善的食源性疾病监控体系，实施全方位的食品安全监控，将有助于提髙食品工业的产品质量，从而保障公众的健康。

金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌，该菌广泛存在于空气、水、尘埃及人和动物等温血动物的皮肤和鼻腔中。金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins，SEs)是由金黄色葡萄球菌（Staphylococcus.aureus）产生的细菌性外毒素。依据SEs的血清型不同，可分为SEA到SEIV等23个血清型，其中SEA到SEI以及SER、SES和SET具有引起以呕吐为主要症状的中毒。SEs可溶于水，具有很强的热稳定性，被金黄色葡萄球菌污染的食物经过加热处理后，即使细菌被杀死，其产生的SE仍然具有生物活性。同时SEs可抵抗外源性蛋白酶比如胃蛋白酶及胰蛋白酶的消化作用，一旦摄入，可引发中毒。据欧洲食品安全委员会统计报告，由SEs引起的食物中毒约占总发病例数的4.1%，但由于检验方法缺乏较好的灵敏度，比例被严重低估。美国疾病预防控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒仅次于大肠埃希菌，居第二位，占细菌性食物中毒的33％。加拿大报告的发生率更高，占细菌性食物中毒的45％。我国每年发生此类中毒事件也非常多，全国各地均有报告，是疾病预防控制部门重点监测的疾病之一。绝大多数的牛皮毛和粘膜中携带有大量的金黄色葡萄球菌，人手皮肤也常携带有金黄色葡萄球菌，在食品生产中，这些细菌可在烹调不当的食物中大量繁殖并产生SEs。因此，在食品卫生检测中，SEs的检出是确定食物是被金黄色葡萄球菌污染的决定因素。由于SEs分子量较小（22-kDa到29-kDa），难以与食物蛋白相区分，检测主要依赖于免疫学检测方法，比如酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）。

牛乳腺炎是严重影响乳品质量的多发病，流行病学调查显示，其发病率可高达56.5%，其中金黄色葡萄球菌是牛乳腺炎主要的致病菌。据国外文献报道，从患有隐性感染或有症状乳腺炎的牛乳腺分泌物中，均可检出多种金黄色葡萄球菌肠毒素，其中以检测到金黄色葡萄球菌肠毒素C最为常见，且浓度与牛乳腺炎严重程度相关。因此，对牛奶等进行金黄色葡萄球菌肠毒素C等毒素的检测，对食品安全具有十分重要的意义，开发灵敏的检测和定量手段，可以做为食品安全监控的重要手段。

金黄色葡萄球菌肠毒素C中毒剂量极低，仅需ng水平即可引起明显中毒症状。目前，检测金黄色葡萄球菌肠毒素C主要通过免疫学方法，有免疫琼脂扩散法、反向间接血凝法、免疫芯片法和酶联免疫吸附法等。免疫琼脂扩散法和反向间接血凝法的缺点是费时、影响分析的干扰因素较多、灵敏度低，特异性差。免疫芯片法存在价格昂贵，操作人员需要经过专业培训，影响分析的干扰因素较多，灵敏度低等不足。酶联免疫吸附法虽然操作简便，适合大通量检测，但是检测敏感性较差。

鉴于此，建立一种葡萄球菌肠毒素C化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，对于在食品中快速、特异、灵敏的检测金黄色葡萄球菌肠毒素C具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种葡萄球菌肠毒素C化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，该试剂盒具备了酶联免疫法的特异性强、重复性好便于大通量检测的特点，同时还具有极高的灵敏度，非常适合于快速定量食品特别是牛奶中的金黄色葡萄球菌肠毒素C。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种葡萄球菌肠毒素C化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒的内容物包括有：抗金黄色葡萄球菌肠毒素C的单克隆抗体，辣根过氧化酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素C检测抗体溶液，金黄色葡萄球菌肠毒素C系列标准溶液，包被溶液、封闭溶液、洗涤液、化学发光液，以及化学发光酶联板，其中：

所述化学发光酶联免疫板的各孔包被有抗金黄色葡萄球菌肠毒素C的单克隆抗体；其中所述包被抗体浓度优选2.5μg/mL。

所述辣根过氧化酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素C检测抗体溶液，是由辣根过氧化酶标记的小鼠抗金黄色葡萄球菌肠毒素C单克隆抗体；使用时用封闭溶液配制成1:16000的工作浓度；