[发明专利]一种有机磷农药降解酶突变体及其制备方法

权利要求书

1.一种有机磷农药降解酶突变体，所述突变体具有如Seq ID No.8或Seq ID No.13所述的氨基酸序列；其中所述Seq ID No.8中第164个氨基酸X₁为苯丙氨酸（F）、色氨酸（W)或异亮氨酸（I）；其中所述Seq ID No.13中第116个氨基酸X₁为蛋氨酸（M）、异亮氨酸（I）、苯丙氨酸（F）或酪氨酸（Y）。

2.根据权利要求1所述的有机磷农药降解酶突变体，其特征在于：其中所述Seq IDNo.8中第164个氨基酸X₁为苯丙氨酸（F），该突变体具有如Seq ID No.6所述的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的有机磷农药降解酶突变体，其特征在于：其中所述Seq IDNo.13中第116个氨基酸X₁为蛋氨酸（M），该突变体具有如Seq ID No.11所述的氨基酸序列。

4.编码如权利要求1所述的有机磷农药降解酶突变体蛋白的基因，所述的基因具有如Seq ID No.12或Seq ID No.7所述的核苷酸序列；所述序列Seq ID No.12中第346-348位的核苷酸N₁N₂N₃为分别编码蛋氨酸（M）、异亮氨酸（I）、苯丙氨酸（F）或酪氨酸（Y）的密码子；所述序列Seq ID No.7中第490-492位的核苷酸N₁N₂N₃为分别编码苯丙氨酸（F）、色氨酸（W)或异亮氨酸（I）的密码子。

5.根据权利要求4所述的基因，其特征在于：所述基因序列Seq ID No.12中第346-348位的核苷酸N₁N₂N₃为编码蛋氨酸（M）的密码子。

6.根据权利要求5所述的基因，其特征在于：所述突变体基因具有如Seq ID No.10所述的核苷酸序列。

7.根据权利要求4所述的基因，其特征在于：所述基因序列Seq ID No.7中第490-492位的核苷酸N₁N₂N₃为编码苯丙氨酸（F）的密码子。

8.根据权利要求7所述的基因，其特征在于：所述突变体基因具有如Seq ID No.5所述的核苷酸序列。

9.携带有如权利要求4-8任一项所述基因序列的载体。

10.一种制备如权利要求1所述有机磷农药降解酶突变体蛋白的方法，所述方法包括如下步骤：

（1）在有机磷农药降解酶突变体基因的两端引入限制性酶切位点，通过酶切操作连接到酵母表达载体上，

（2）将表达载体转化导入酵母菌中，经筛选得到重组基因工程菌；

（3）高密度发酵重组酵母菌，诱导表达后离心收集发酵上清液，经分离纯化获得重组有机磷农药降解酶突变体蛋白。