[发明专利]检测莱克多巴胺的化学发光免疫检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测莱克多巴胺的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于由以下组分组成：

(1)96孔不透明白色酶标板，12条×8孔，包被有莱克多巴胺-人血清白蛋白交联复合物，用铝膜真空密封包装；

(2)莱克多巴胺标准品溶液6瓶，浓度分别为：

0μg/L、0.04μg/L、0.12μg/L、0.36μg/L、1.08μg/L、3.24μg/L；

(3)莱克多巴胺-辣根过氧化物酶标记抗体溶液，

(4)发光底物A液为鲁米诺及增强剂，发光底物B液为尿素过氧化氢；

(5)100倍浓缩缓冲液，使用前稀释100倍成为工作浓度缓冲液，其稀释后的工作浓度缓冲液为0.05mol/L PBST缓冲液，pH 7.4，含0.05％(v/v)Tween-20；

所述组分的制备为：

莱克多巴胺半抗原的准备：将莱克多巴胺酸化，在4℃无光低温环境中与亚硝酸钠作用，生成含重氮基正离子的中间体，重氮化的莱克多巴胺作为半抗原，用于后面合成免疫抗原与包被抗原；

人血清白蛋白-莱克多巴胺包被抗原的合成：将莱克多巴胺与人血清白蛋白采用重氮化法进行偶联得到免疫抗原；

莱克多巴胺-过氧化物酶标记抗体的制备：将上述免疫抗原注入Balb/C小鼠体内，经多次加强免疫后，使其产生抗体血清，取出免疫后小鼠的脾细胞，加入离心管中混匀，将上述脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，在含有HAT溶液的96孔培养板中进行CO2培养，筛选阳性孔，然后利用有限稀释法得到分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，取健康Balb/C小鼠，腹腔注射灭菌液体石蜡1mL，7d后向腹腔注射上述杂交瘤细胞悬液1mL，7d后采集腹水，加等量液体石蜡稀释，加入二氧化硅粉末混匀，离心得澄清腹水，澄清腹水用辛酸-硫酸铵法进行纯化，再经透析得到纯化的莱克多巴胺单克隆抗体，莱克多巴胺单克隆抗体与辣根过氧化物酶偶联，从而得到莱克多巴胺-过氧化物酶标记抗体；

包被有莱克多巴胺-HSA交联复合物的不透明白色酶标板制备：用缓冲液将莱克多巴胺-HSA交联复合物稀释后用于包被不透明白色酶标板的检测孔，4℃过夜后用PBST缓冲液洗涤，然后加入200μL封闭液，所述封闭液含2％(w/v)HSA的PBST，37℃温育2h，倾去孔内液体，干燥后完成。