[发明专利]一种硒化聚甘露糖醛酸制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于硒化多糖技术领域，具体涉及一种硒化聚甘露糖醛酸制备方法及其应用。

背景技术

褐藻胶是一种水溶性酸性多糖，主要从巨藻、马尾藻、海带等褐藻的细胞壁中提取得到，具有独特的结构和生物活性。其结构上由α-1,4-L-古罗糖醛酸(α-1,4-L-guluronic acid，简写为G)和β-l,4-D-甘露糖醛酸(β-l,4-D-mannuronicacid，简写为M)通过l-4糖苷键连接而成的直链阴离子多糖。整个分子由三种片段构成：聚甘露糖醛酸片段(Poly-mannuronate，PM)、聚古罗糖醛酸片段(Poly-guluronate，PG)和聚甘露糖醛酸-古罗糖醛酸杂合段(PMG block)。因此，通过已有的酸解方法可以分离出单一的聚甘露糖醛酸。聚甘露糖醛酸结构特殊是C5上连有羧基的酸性化合，且结构上不含硫，对其进行硒化存在一定的困难，因此采用先磺化再硒化的方法对其进行硒化。

硒元素是生命活动的必须元素，其存在形式有无机硒和有机硒两种，常见的无机硒有亚硒酸钠和硒酸钠，有机硒主要是硒蛋白和硒多糖。硒能构成若干氧化酶的活性中心，可增强机体的抗氧化能力和对相关疾病的抵抗能力。这说明了硒与人体健康的直接关系。无机硒具有蓄积性毒性和致突变作用，使用时剂量难以控制，而有机硒毒性低，副作用小，不但能够更好地发挥硒的作用，而且在激发免疫反应上比无机硒显著，因此，将无机硒与多糖有机结合使之转化为有机硒化合物硒多糖，将会使硒和多糖的生理和药理功能得到优化。

目前有多糖对阿尔兹海默症（AD）的作用，但尚未见硒多糖对AD作用的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术之缺陷，提供一种硒化聚甘露糖醛酸制备方法及其应用。

本发明提供一种硒化聚甘露糖醛酸的制备方法，其包括如下步骤：

制备磺化聚甘露糖醛酸：将聚甘露糖醛酸悬浮于无水有机溶剂中，在搅拌条件下加入无水有机溶剂溶解的三氧化硫-吡啶复合物，在20～100℃恒温度下反应1～10小时，加入2～4倍体积的95%的乙醇，离心分离反应产物，再用95%的乙醇洗涤，加水溶解，用碱调节pH至中性，透析，过滤，冷冻干燥，得磺化聚甘露糖醛酸；

制备硒化聚甘露糖醛酸：按质量比为1：0.1～10将所述磺化聚甘露糖醛酸与亚硒酸盐在酸性溶液中、Ba²⁺的催化下20～100℃恒温度下反应2～20小时，磺化聚甘露糖醛酸与氯化钡摩尔比为1：1～100，加入硫酸盐以去除Ba²⁺，离心取上清液，用碱调节pH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗坏血酸检测透析袋内液不变红为止，过滤，冷冻干燥，获得所述硒化聚甘露糖醛酸。

以及，提供上述硒化聚甘露糖醛酸的制备方法所制备的硒化聚甘露糖醛酸在阿尔茨海默症预防和治疗的药物以及保健品中的应用。

本发明的硒化聚甘露糖醛酸的制备方法，采用先磺化再硒化的制备方法，具有成本低，产率高的优势。而且通过透析法有效除去过量的亚硒酸根，同时也可以透析除去其他小分子无机化合物和低聚糖。同时，该制备方法所制备的硒化聚甘露糖醛酸具有预防和治疗阿尔茨海默症的作用。

附图说明

图1是本发明实施例的聚甘露糖醛酸（a）、磺化聚甘露糖醛酸（b）和硒化聚甘露糖醛酸（c）的红外光谱图；

图2是本发明Se-PM和Na₂SeO₃、磺化聚甘露糖醛酸、PM、不同聚合度的寡糖混合物（MOM）对H₂O₂损伤的N2a-APP695-sw细胞保护后的细胞存活率关系图；

图3是硒化聚甘露糖醛酸、硒化卡拉胶和Na₂SeO₃对N2a-APP695-sw细胞中BACE1和APP蛋白表达的影响：Western blot检测结果原图，1是对照，2是Se-PM，3是Se-Carr，4是Na₂SeO₃；

图4是硒化聚甘露糖醛酸、硒化卡拉胶和Na₂SeO₃对N2a-APP695-sw细胞中BACE1蛋白表达的影响：Quantity one软件对BACE1蛋白条带进行光密度分析的结果，1是对照，2是Se-PM，3是Se-Carr，4是Na₂SeO₃；