[发明专利]烟草NtFT1基因的cDNA序列及其瞬时表达诱导烟草早花

权利要求书

1.一种烟草NtFT1基因的cDNA序列及其瞬时表达诱导烟草早花，其特征在于从烟草中获得植物开花时间调节基因的全长cDNA，命名为NtFT1，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1。

2.根据权利要求1所述的烟草NtFT1基因的cDNA序列及其瞬时表达诱导烟草早花，其特征在于所述的NtFT1基因编码的多肽序列，具有如SEQ ID NO:2所示的177个氨基酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的烟草NtFT1基因的cDNA序列及其瞬时表达诱导烟草早花，其特征在从烟草中克隆烟草NtFT1的PCR引物，

引物序列为正向引物：NtFT1-F: ATGCCAAGAGAACGTGAACC；

反向引物NtFT1-R: TCAATCGGCAGACCTTCTAC。

4.根据权利要求1或2所述的烟草NtFT1基因的cDNA序列及其瞬时表达诱导烟草早花，其特征在从烟草中克隆烟草NtFT1基因的具体方法如下，

首先利用拟南芥FT基因序列作为搜索序列，在Genbank烟草GSS数据库中用tblastx程序进行比对，获得一致性最高的烟草基因组序列（FH969747.1），

利用该序列搜索中国烟草基因组计划测序数据库，将该序列向两侧延伸得到10000bp左右的基因组序列信息；

通过剪切位点分析，获得候选烟草FT基因的cDNA序列，如序列SEQ ID NO:1；

根据候选序列设计PCR引物NtFT1-F和NtFT1-R，取黑烟草Narrow leaf madole即将开花烟株的叶片，利用Trizon（Invitrogen）试剂提取RNA，用SuperScript RT Kit（Invitrogen）合成cDNA第一链，然后用NtFT1-F和NtFT1-R进行RT-PCR，PCR产物测序结果与候选序列100％一致。

5.根据权利要求3所述的烟草NtFT1基因的cDNA序列及其瞬时表达诱导烟草早花，其特征在扩增所述基因的全长或基因中任一片段的引物对。

6.根据权利要求1或2所述的烟草NtFT1基因的cDNA序列及其瞬时表达诱导烟草早花，其特征在构建烟草NtFT1基因的病毒瞬时表达载体具体过程如下，

将已构建的拟南芥FT基因的PVX表达载体pCAM﹕pGR106-FT的FT基因用Cla I和Sal I切下，回收大片段质粒片段；

NtFT1基因里有Sal I酶切位点，在扩增NtFT1 cDNA片段的正反引物上分别引物Cla I和Xho I 

F: ATCGAT ATGCCAAGAGAACGTGAACC，下划线所示为Cla I酶切位点；

R: CTCGAGTCAATCGGCAGACCTTCTAC，下划线所示为Xho I酶切位点 ，

Xho I是Sal I的同尾酶；

PCR产物经测序验证后与上述回收的载体片段连接，获得NtFT1 PVX瞬时表达载体pCAM﹕pGR106-NtFT1。

7.烟草NtFT1基因在调节烟草开花中的应用，其特征在于将上述PVX病毒表达载体pCAM﹕pGR106-NtFT转化农杆菌菌株GV3101，经农杆菌渗滤后，使NtFT1在受体烟株中瞬时表达，促使烟草在渗滤后40～50天开花。

8.构建的重组载体（pCAM﹕pGR106-NtFT1）作为能够诱导烟草早花，应用于烟草育种。