[发明专利]基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法

权利要求书

1.一种基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法，包括制备表面修饰有拉曼活性染料和抗体的金纳米颗粒探针，抗原与抗体免疫夹心反应使纳米颗粒之间的距离拉近，产生表面等离子体耦合效应，显著增强纳米颗粒表面修饰染料的拉曼信号，利用耦合增强效应和拉曼光谱自身性质实现了多组分SERS定量分析。

2.根据权利要求1所述的基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法，包括如下步骤：

（1）制备表面修饰有拉曼活性染料和抗体的金纳米颗粒探针；

（2）将待测物样品加入到含有步骤（1）所述的金纳米颗粒探针的PBS缓冲溶液中，进行免疫夹心反应；

（3）对反应后的样品溶液进行检测。

3.如权利要求2所述的分析方法，其特征在于，步骤（1）所述的金纳米颗粒探针包括修饰有拉曼活性染料和抗体的金纳米棒探针，修饰有拉曼活性染料和抗体的金纳米球探针。

4.如权利要求2所述的分析方法，其特征在于，所述抗体均经过三（2-羧乙基）膦盐酸盐还原处理。

5.如权利要求2所述的分析方法，其特征在于，步骤（3）所述的检测是对反应后的样品溶液进行拉曼光谱扫描。

6.如权利要求2至5任一项所述的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：

（1）制备表面修饰有拉曼活性染料和抗体的金纳米棒探针：

（a）取三（2-羧乙基）膦盐酸盐溶液加入到抗体溶液中，充分混匀，37℃培育；

（b）取金纳米棒溶液，离心去除多余的CTAB保护剂，将金纳米棒重新分散在灭菌水中，取中性表面活性剂Brij 56溶液加入到金纳米棒溶液中，充分混匀，37℃培育，置换掉金纳米棒表面的CTAB保护剂，再次离心去除多余的Brij 56，将金纳米棒重新分散在灭菌水中；

（c）向步骤（b）所得的金纳米棒溶液中加入经步骤（a）还原处理后的抗体溶液，30℃培育；取拉曼染料溶液加入到该溶液中，充分混匀，30℃培育；再加入BSA溶液，充分混匀，30℃培育；标记过程结束后，反复离心三次去除多余的抗体和拉曼染料，将离心得到的金纳米棒重新分散在PB溶液中，4 ℃储存备用；

（2）制备表面修饰有拉曼活性染料和抗体的金纳米球探针：

（a）取三（2-羧乙基）膦盐酸盐溶液加入到抗体溶液中，充分混匀，37℃培育；

（b）取金纳米球溶液，离心去除上层溶液，将金纳米球重新分散在灭菌水中，取拉曼染料溶液加入到该溶液中，充分混匀，37℃培育；加入经步骤（a）还原处理后的抗体溶液，充分混匀，37℃培育；再加入BSA溶液，充分混匀，37℃培育；标记过程结束后，反复离心三次去除多余的抗体和拉曼染料，将离心得到的金纳米球重新分散在PB溶液中，4 ℃储存备用；

（3）对反应后的样品溶液进行检测：分别取步骤（1）制备的金纳米棒探针，步骤（2）制备的金纳米球探针和含有待测物抗原的样品溶液加入到PBS缓冲溶液中，充分混匀，37℃培育，反应结束后，使用拉曼光谱仪对产物溶液进行拉曼光谱扫描。