[发明专利]伤寒甲型副伤寒结合疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及含有抗原的医药制品领域，特别是涉及一种伤寒甲型副伤寒结合疫苗及其制备方法。

背景技术

伤寒是由对人有致病力的沙门氏伤寒杆菌引起的一种全身性、急性、发热性传染病。主要表现为持续性高热，腹痛、不适、头痛及小肠结肠炎症等症状。通过改善公共卫生条件可以降低伤寒的发病率，但是，有效的控制该病流行的最佳方式仍是预防免疫。

沙门氏菌具有复杂的抗原构造，一般可分为3类抗原：(1)Vi抗原或表面抗原，即荚膜多糖；(2)0抗原或细胞壁抗原，是细胞壁的脂多糖，即内毒素；(3)H抗原或鞭毛抗原，是一种蛋白质抗原。沙门氏菌的不同菌株都有荚膜多糖，它具有抗吞噬作用和保护细菌避免相应的抗体在补体参与下的溶菌作用。同时，荚膜可以保护细菌在血液中得以生存。特异性的抗荚膜多糖抗体与细菌结合后通过活化补体而杀死伤寒杆菌。鉴于荚膜多糖这些与细菌侵袭力和毒力有关的特性，Felix和Pitt于20世纪50年代将沙门氏杆菌的荚膜多糖命名为Vi抗原，随后的研究发现，用粗制的Vi荚膜多糖抗原免疫小鼠后，小鼠可获得对伤寒沙门氏菌感染的抵抗力，可保护小鼠免受再次感染。

伤寒疫苗有注射用灭活全菌体疫苗、口服灭活全菌体疫苗、口服减毒活疫苗、Vi多糖疫苗等。20世纪60-70年代，灭活全菌体疫苗在许多国家进行了临床研究，效果不理想，已停止使用。链霉素依赖性伤寒突变株活疫苗在正常人体内繁殖能力较差，免疫后效果难尽人意，且冻干型的该种疫苗又完全丧失保护力，也停止了研究。伤寒Ty21a减毒活疫苗经过了大量临床实验，已被证实是目前较安全有效的伤寒疫苗之一，而且没有严重的副反应，但长期以来一些学者对Ty21a突变株提出以下仍然具有争议的问题：该减毒株的遗传稳定性不能确定，并推测其有毒力返祖的可能；gale基因的突变不能完全解释该疫苗的减毒机制；有其他不明部位的基因发生了突变；冻干剂型疫苗的稳定性不规律以及口服接种次数过多等。伤寒Vi多糖（又名伤寒荚膜多糖）疫苗与其他的多糖疫苗一样，为T淋巴细胞非依赖性抗原，不能用于2岁以内儿童的免疫，再次免疫接种时不会产生免疫记忆反应。伤寒Vi多糖疫苗免疫原性低且抗体水平不能保持在高水平，原因在于其多糖是半抗原，为非T细胞依赖性抗原，接种后不能激活Th细胞和T记忆细胞，不产生回忆加强反应。

多糖诱导抗体主要是通过刺激B细胞产生IgM和少量IgG抗体。由于它是非T细胞依赖性抗原(TI)，存在一定的缺点，表现在：①在婴幼儿体内产生的免疫反应很弱；②无免疫记忆及增强效应；③普通佐剂对之不易起到作用。所以此疫苗虽然有效、安全，但仍需改进。美国NIH的国立儿童健康和人类发育研究所（National Institute of Child Health and Human Development）研制的伤寒Vi多糖和重组绿脓杆菌外毒素A偶联制备的结合疫苗，在越南已完成三期临床试验，显示出良好的安全性和有效性。本发明参考了NIH的研究结果，结合冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的研制和生产经验，确定了多糖－蛋白结合物的制备和纯化工艺，多糖检定，活化蛋白所需EDAC的浓度及己二酰肼的浓度，衍生物的纯化、检定，Vi多糖和蛋白浓度，结合物的纯化、检定，结合物的抗原性，免疫原性、生化等质量标准，以及结合物的稳定性，安全性等进行了多方面的研究，并通过了各项实验室检定，成功制备出伤寒Vi多糖与破伤风类毒素（TT）的结合物原液伤寒Vi－TT。

甲型副伤寒 (S. paratyphoid A副甲) 是在东南亚、南亚、撒哈拉以南的非洲地区流行的伤寒肠热症中仅次于伤寒居第二位的病原菌，在我国广西、贵州等地区也时有爆发，严重危害人民健康。在地方流行区，学龄儿童的发病率最高。随着伤寒Vi多糖疫苗的广泛运用，原有的伤寒、副甲、副乙三联菌体苗（TAB）由于副反应大，已不再使用，形成伤寒发病逐渐减少，而副甲的疫情凸现的情况。市场迫切需要新的甲型副伤寒疫苗。