[发明专利]多抗体标记的降钙素原快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种多抗体标记的降钙素原快速检测试剂盒。

背景技术

1993年，Lancet首次报道降钙素原（前降钙素，PCT）水平在败血症时显著升高，血PCT浓度大于0.5ng/ml时提示败血症可能，大于2ng/ml提示败血症的存在，大于10ng/ml则提示严重的脓毒败血症或休克，PCT可作为诊断脓毒败血症的特异性指标。

近年，随着研究的深入，人们逐渐发现，细菌感染早期往往已经有PCT的低水平升高（0.1ng/ml～0.5ng/ml），PCT升高水平与细菌性感染严重程度及范围有关，PCT水平大于0.25ng/ml时即建议使用抗生素治疗。正常健康人群PCT水平极低（小于0.05ng/ml），非细菌性感染或炎症（如病毒性感染，真菌性感染或自身免疫性炎症等）往往不伴随PCT的升高或轻微升高，因此PCT不仅能作为败血症的诊断指标，更广泛应用于细菌性感染的早期诊断和鉴别诊断，指导临床抗生素使用，并用于治疗疗效及预后监测。采用胶体金标记的降钙素原检测试剂盒有检测快速、操作简便的特点，但常规技术下的降钙素原胶体金免疫层析试剂检测灵敏度很难达到0.25ng/ml。

申请号为93118343.X（公开日：1993.8.19）的专利文件披露了一种用于实现早期检测败血症并对治疗进行跟踪的方法的药盒，该药盒能够测定前降钙素含量为0.1～500ng/ml血清或血浆，进而判断败血症的存在，严重程度以及/或者对败血症的治疗效果；该药盒具体包含两种抗体：（1）一个或多个固定在载体上用以与样品中的前降钙素结合的第一单克隆或多克隆抗体；（2）另一携带标记并且与前降钙素在不同于第一抗体的结合区域的另一区域相结合的抗体。该药盒能够实现的技术效果是：通过测定患者体液样品中的肽前降钙素和/或其形成的非完整降钙素片断的含量，通过测定这种确定的肽是否存在，含量的多少，得出有关是否有败血症，败血症的严重程度以及/或者治疗效果的结论。

然而，前述专利文献披露的技术方案存在诸多技术缺陷，本领域技术人员通过常识很明显可以知晓，前述专利中的所谓的“一个或多个固定在载体上用以与样品中的前降钙结合的第一单克隆或多克隆抗体”，其本质是前降钙素的捕获抗体，但是，在该技术方案中，对应的标记抗体仅为一种。专利文献在其说明书第4页指出：本发明意义上的“前降钙素”表示一种或多种肽；所有这些肽都包含由57个以上氨基酸组成的肽序列，特别是象完整的前降钙素那样的116个氨基酸序列，它们或与已知的序列一致，或者部分一致，只是在相应于前降钙素的第108至116个氨基酸区域可能存在差异。显然，专利文献中所述的仅一种标记抗体是无法实现对多种“前降钙素”片段进行有效标记的，从而无法保证尽可能多位点结合的“前降钙素”被检测出来，如果在此专利技术上采用胶体金、彩色磁珠等显色剂作为标记物标记单个抗体，将导致检测的灵敏度偏低，实践应用效果大打折扣。

例如：来自于该专利技术的降钙素原胶体金免疫层析试剂PCT-Q所能实现的检测下限仅仅为0.5ng/ml，该专利为德国B.R.A.H.M.S所用，只可以满足败血症的筛查诊断，而不能达到用于细菌感染诊断和指导抗生素应用的0.1ng/ml的检测灵敏度需求；分析其原因，通过胶体金、彩色磁珠等标记抗体实现检测，是基于胶体金、彩色磁珠具有显色性，当一定量的胶体金或彩色磁珠通过被标记抗体与待测抗原结合后，通过待测抗原与捕获抗体的结合使得胶体金颗粒或彩色磁珠颗粒聚集在一起，则形成肉眼可见的线条，当待测抗原浓度越高，则聚集在一起的胶体金或磁珠越多，线条的强度就越强，通过配套的仪器进行分析判读，就可测出待测抗原的浓度。以胶体金为例，常规用于抗体标记的胶体金颗粒的直径多在20～40nm，胶体金颗粒之间存在空间位阻，如果只是标记针对降钙素原某一个区域的一个抗体，那么能结合在抗体上的胶体金的数量是有限的，当待测降钙素原的浓度很低时，能够结合的这一个标记抗体的数量也是很少的，因此即便采用多个抗体作为捕获抗体，能够通过标记抗体而被捕获聚集的胶体金的数量也较少，难以形成肉眼可见的线条，因此难以达到较高的检测灵敏度。而采用本技术方案进行不同区域的多抗体标记，待测的降钙素原可以结合不同区域的标记抗体，那么能够结合在降钙素原上的胶体金颗粒更多，即便在检测浓度很低的降钙素原时，其能够聚集的胶体金颗粒更多更易产生可被分析的线条，从而显著提高检测灵敏度。