[发明专利]一种能防治番茄青枯病的微生物植物疫苗

说明书

一、技术领域

本发明一种能防除连作番茄青枯病的微生物植物疫苗，属于农业集约化生产技术，专用于克服和消除连作番茄青枯病问题。 

二、背景技术

番茄青枯病是由茄科罗尔斯通氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的细菌性维管束土传病害。1906年美国Simth学者首次发现并报道这一病害，至今全世界除南极洲外，其他国家和地区均有青枯菌的存在。罗尔斯通菌被分为五个生理小种和6个生化小种。各小种对番茄均有一定的致病能力，其中生理小种1对番茄的致病力最强。在我国，番茄青枯病主要发生在温暖湿润的南方，随着气候变暖和高效农业发展，青枯病逐渐向我国北方发展。青枯菌能通过土壤、流水(灌溉等)、种子等方式传播，对环境有很强的适应能力。土壤中存在青枯菌后，初期由于病菌数量少，植株生长受到限制，矮小，果实小，农民往往认为是养分问题而加大氮肥投入，导致土壤中微生物群落进一步失衡，番茄连作3季以上，病原菌在根际成优势，就能侵染番茄。在高温高湿的条件下，病害发展迅速，发病严重的田块发病率达100％，造成绝收。目前南方很多蔬菜基地不再适合种植番茄，对我国番茄市场的发展影响很大。目前没有防治番茄青枯病的有效手段，利用根际微生物防治病害是综合防治土传病害的重要措施之一。生防菌的根际定殖和内生能力是影响其防效的关键因子。生物防治技术满足现代农业对环境保护，食品安全等的要求，是实现农业可持续农业发展的有效方法之一。 

三、发明内容

1.技术问题 

本发明的目的在于开发一种能防治连作番茄青枯病的微生物植物疫苗，克服或消除连作番茄作物青枯病效率达到70％以上，减少或完全替代农药的使用，确保集约化农业的顺利发展。 

2.技术方案 

防除连作番茄青枯病的生防菌NJQL-A6，该微生物属于皮氏罗尔斯通菌(Ralstonia pickettii)，2012年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.6628，主要生物学特性为革兰氏染色阳性G-， 细胞形状为短杆状，0.5～0.6×1.5～3.0μm，单一极生鞭毛，不形成芽孢，严格好氧生长，在平板上不产色素，氧化酶、接触酶反应阳性，硝酸还原酶阳性，淀粉水解阴性，明胶水解阴性，精氨酸双水解酶阴性，卵黄反应阴性，脂肪酶，磷酸酶，脯氨酸氨肽酶等呈阳性。发酵丙三醇、D-木糖、L-阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、果糖；己二酸，L-色氨酸，L-络氨酸、γ-氨基丁酸、L-天冬氨酸盐、L-缬氨酸、L-苏氨酸、甘氨酸和苏氨酸、L-丝氨酸、能利用核酸盐、L-谷氨酸盐、葡萄糖酸盐，奎酸盐，苹果酸盐，柠檬酸盐，乙酸盐、丙酸盐，丁酸盐、马尿酸盐等。 

用生防菌NJQL-A6所生产的防除连作番茄青枯病微生物植物疫苗，该疫苗中含有1×10⁸个/ml以上的生防菌NJQL-A6。 

所述的防除连作番茄青枯病微生物植物疫苗，其生产方法包括： 

选用生防菌NJQL-A6，接种到KB(20g蛋白胨，10mL甘油，1.5g MgSO₄·7H₂O，1.5g FeSO₄7H₂O，蒸馏水1L，pH 7.2，121℃灭菌20min)或CPG(10g蛋白胨，1g水解络蛋白，5g葡萄糖，18g琼脂，1L蒸馏水，pH 7.2，115℃，高压灭菌30min)培养液，进行液体发酵生产，其发酵生产的条件为：pH生长范围6-8，培养温度范围25～37℃，搅拌速度为170～300转/分钟，发酵液含菌量≥1×10¹⁰个/ml。 

所述微生物植物疫苗可专用于防除连作番茄青枯病。 

3.有益效果 

本发明一株防控连作番茄青枯病的微生物植物疫苗，具有如下优点： 

1)生防菌NJQL-A6是青枯菌同属菌，其生活习性与青枯菌类似(但对植物不致病)，与青枯菌竞争营养物质和生存位点的能力非常强。该菌施入土壤后能在番茄根际形成优势群，起到保护植物根系的作用，抵御病菌的侵染。 

2)该菌株内生性能好，在番茄茎基部稳定大量存活。针对已经被青枯菌感染的植株，通过地上部接种，该生防菌可以快速在植物体内扩散大量定殖，抵御病菌进一步侵染。 

3)本发明田间施用方便，用量少。在育苗期伤根浇灌该生防菌悬液，可使菌株在苗期在根部和根内定殖，在育苗期间即完成疫苗施用。